تشخيص القوباء

ويستند تشخيص الهربس على سير إفراز الفيروس الكلاسيكي في مزارع الخلايا الحساسة، المناعي وطرق المصلية، وإجراء الدراسات بمنظار المهبل باستخدام أساليب الجزيئية البيولوجية الحديثة (PCR، نقطة التهجين)، والذي يسمح لك لتشخيص كل مجموعة هربس، بما في ذلك HHV-6 و HHV-7 أنواع.

طرق التشخيص المختبري للعدوى العقبولية

الطرق الرئيسية تهدف إلى إفراز HSV أو الكشف عن الجسيمات الفيروسية و / أو مكوناتها	طرق مساعدة تهدف إلى الكشف عن الأجسام المضادة لـ HSV في السوائل البيولوجية لجسم الإنسان
عزل HSV في الثقافات الحساسة من الخلايا والحيوانات المجهر الإلكتروني المباشر والمناعي خيارات MFA المباشرة وغير المباشرة IFA طرق بيولوجية جزيئية تراص اللاتكس	رد فعل تحييد RSK تحديد الأجسام المضادة للبروتينات غير الهيكلية من HSV-1،2

تبين أن 76 ٪ من المرضى يعانون من الهربس التناسلي (GH) الناجم عن HSV-2 ، وفي 24 ٪ - HSV-1. و GG كما monoinfection وقعت فقط في 22 ٪ من المرضى ، في 78 ٪ من الحالات ، تم الكشف عن الجمعيات الميكروبية. في 46 ٪ من المرضى ، تم الكشف عن parasitocenosis الناجمة عن اثنين من مسببات الأمراض ، بما في ذلك المتدثرة في 40 ٪ من الحالات. أقل في كثير من الأحيان في المسحات يحدد gardnerelly ، Trichomonas ، gonococci.

في 27 ٪ من المرضى ، تم تمثيل الطفيلي من قبل ثلاثة ، و 5.2 ٪ من أربعة مسببات الأمراض. وعلاوة على ذلك ، لوحظ في كثير من الأحيان مجموعة من الكلاميديا مع غاردينريلا وفطريات من جنس المبيضات. تبرر هذه البيانات الحاجة إلى الفحص البكتريولوجي شامل لمرضى YY لتحديد تركيبات وكيل المسببة للأمراض، وكذلك دراسة متعمقة من التسبب في العدوى المختلطة في الجهاز البولي التناسلي، والتي من شأنها أن تسمح لعلاج معقد متباينة من العدوى HSV.

المواد التي يتعين دراستها في عزل HSV اعتمادا على توطين الآفات العقبولية

توطين الآفات	محتويات الحويصلات	كشط الخلية				SMZ	نضح من القصبات الهوائية	عينة الخزعة	دم
		1	2	3	4
جلد	+								+
عيون			+						+
الأعضاء التناسلية				+					+
شرج	+				+				+
فم	+	+							+
CNS	+					+		+	+
الرئتين		+					+		+
الكبد								+	+
القوباء الخلقيه	+	+	+				+		+

طرق التشخيص المختبري لعدوى الفيروس المضخم للخلايا

طرق	الوقت اللازم للحصول على النتائج	الملاحظات
الفيروسية
المجهر الإلكتروني	3 ساعات	Malodostupen
عزل الفيروس في زراعة الخلايا (CPD)	4-20 يوم	قياسي ، بطيء
تلطيخ مناعي من أوائل AH مع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة	6 ساعات	أقل محددة
TSITOLOGICHESKIY	2-3 ساعات	أقل محددة
SEROLOGICHESKIY
RSK	يومين	معيار
Ssubsistence	يوم واحد	مستغرق وقتا طويلا
RIF	6 ساعات	بسيطة ومحددة
NRIF	6 ساعات	مجمع
RIMF	6 ساعات	مجمع
IFA (IgM، TO)	6 ساعات	سريع وبسيط
طخة مناعية	6 ساعات	تكلفة
الجزيئية البيولوجية
MG	5-7 أيام	مكلفة ، وتستغرق وقتا طويلا
PCR	3 ساعات	تكلفة

طرق لتشخيص فيروس الهربس النطاقي

طرق التشخيص	تقنيات مخبرية
غير مباشرة
توزيع	ثقافة النسيج ، أجنة الدجاج ، حيوانات المختبر ، الزراعة المشتركة مع الخلايا المسمّاة أو الفيروسات المساعدة
تحديد العزلات	تفاعل التحييد ، DSC ، IF ، IPPE ، تفاعلات العزلات المترسبة ، التراص ، IF
مستقيم
علم الخلايا	مسحات: لون تألق
الأنسجة	Pathomorphology من الخلية
هيكل	الميكروسكوب الجنيني ، المجهر المناعي
تحديد المستضدات	IF، PIÉF، RIM، IFA
تحديد الإنتاج المحلي للأجسام المضادة	Ig M، Ig G، Ig A: IFA، RIA
المناهج البيولوجية الجزيئية	التهجين الجزيئي ، PCR

التشخيص المختبري للعدوى الناجمة عن فيروس الهربس النطاقي

مشاكل التشخيص	طرق	النتائج المتوقعة
العدوى الأولية الحادة	1	الكشف بعد ساعتين
	2	مستوى الأجسام المضادة ينمو ببطء
	3	الحاضر 3 أيام بعد الإصابة
العدوى إعادة تنشيط الحادة	1	كشف ULV في 2 ساعة
	2	مستوى الأجسام المضادة ينمو ببطء
	4	بعد 4 أيام من ظهور الطفح الجلدي

1. التحديد في السائل من حويصلات WIEF.
2. علم الأمصال: DSC ، ELISA ، تهدف إلى تحديد
3. علم الأمصال: ELISA ، تهدف إلى الكشف عن IgM.
4. علم الأمصال: ELISA ، تهدف إلى الكشف عن IgA ، IgM.

طرق للإشارة إلى الاستجابة المناعية للعدوى بسبب فيروس الهربس النطاقي

نهج	طريقة
كشف عيار الأجسام المضادة المتزايد في الأمصال الثانية	RSK ، RTGA ، RPGA ، تفاعل التعادل ، IF ، RIM ، ELISA
كشف Ig G، Ig A الأجسام المضادة الخاصة بالفئة في العينة المصلية الأولى	IFA، IF، RIM، latex-agglutination

تفسير نتائج الفحص المصلي لمصل المريض على عدوى فيروس ال herربس (ELISA)

اسم العدوى / العلامة	متوسط العتبات للعدوى
	نتائج التحليل	ترجمة
المضخم للخلايا المضاد لـ CMV IgG (1-20 E / ml) مضاد لـ CMV IgM (100-300٪)	إيجابي 1-6 إيجابي 6-10 إيجابي> 10 سلبي إيجابي 100-300 سلبي <90 مشكوك فيه 90-100	مغفرة تفاقم المرض المرحلة الحادة من المرض لا عدوى (مرض) المرحلة الحادة من المرض كرر التحليل بعد 2-3 أسابيع
الهربس البسيط 1،2 الأنماط المصلية المضادة لل HSV 1/2 المجموع. (100-900٪)	موجب 100-400 موجب 400-800 موجب> 800 سالبة <100	مغفرة تفاقم المرض المرحلة الحادة من المرض لا عدوى (مرض)

يعرض الجدول الطرق الرئيسية للتشخيص المختبري للعدوى بالفيروسات ، كما يوصي أيضًا بالمواد البيولوجية التي يتم فحصها لعزل فيروس الهربس البسيط ، مع الأخذ في الاعتبار توطين الآفات العقبولية.

يمكن الاعتماد عليه في توزيع الهربس البسيط و CMV من خلال عدوى ثقافات الخلية الحساسة. وهكذا ، في الفحوصات الفيروسية من 26 مريضا في فترة الانتكاس ، تم عزل HSV على ثقافة خلايا فيرو الحساسة في 23 حالة (88.4 ٪). في الثقافات المصابة ، لوحظ وجود نمط من خصائص عمل الاعتلال الخلوي للـ HSV ، وهو تكوين خلايا عملاقة متعددة النوى أو تراكم خلايا مدورة ومتضخمة في شكل عناقيد. في 52.1 ٪ من الحالات ، كان من الممكن الكشف عن بؤر لتأثير الفيروس الخلوي من خلال 16-24 ساعة بعد الإصابة. وبنسبة 48-72 ساعة من احتضان الثقافات المصابة ، ارتفعت نسبة المواد المسببة لتدمير خلايا معينة إلى 87٪. وفقط في 13 ٪ من الحالات ، تم الكشف عن نتائج إيجابية بعد 96 ساعة من العدوى وأكثر أو مع تكرار المرور.

طرق التشخيص المختبري للعدوى العقبولية المعممة

الطرق الرئيسية تهدف إلى كشف (عزل) فيروسات الحلأ ، جزيئاتها ومكوناتها	الطرق المساعدة التي تهدف إلى الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس القوباء في السوائل البيولوجية ، والكشف عن التحولات الأنزيمية في مصل الدم
عزل فيروس الهربس على مزارع الخلايا الحساسة والحيوان المجهر الإلكتروني المباشر والمناعة طريقة المناعي ظهور المباشر وغير المباشر تجسيد المباشر وخيارات تقنية الأجسام المضادة الفلورسنت غير المباشرة خيارات ELISA التضمين من الجزيئية (DNA-DNA) التهجين تفاعل البلمرة المتسلسل رد الفعل تراص اللاتكس	تحييد رد فعل تكملة تثبيت رد فعل تراص اللاتكس غير المباشر الفلورسنت طريقة الأجسام المضادة تجسيد غير المباشر طريقة المناعي ظهور البديل التضمين ELISA الطريقة في مأمن النشاف تثبيت شعاعي من طريقة تكملة تحديد مستويات ألانين واسبارتاتي

لتشخيص كريات الدم البيضاء المعدية (العدوى التي تسببها VEB) ، يتم استخدام الطرق المصلية. رد فعل بول بونيل مع كريات الدم الحمراء من الكبش ، عيار التشخيص من 1:28 وأعلى مع دراسة واحدة من المصل ، أو زيادة 4 أضعاف في الأجسام المضادة في دراسة الأمصال المقترنة. استخدم تفاعل Goff-Bauer مع تعليق 4٪ من خلايا الدم الحمراء الرسمية للخيول. تؤخذ النتيجة في الاعتبار بعد دقيقتين ، مع كثرة كريات الدم البيضاء المعدية رد الفعل هو محددة للغاية.

حاليا ، يجري تطوير المناعية الانزيم (ELISA) لتشخيص عدد كريات الدم البيضاء المعدية. عندما الأجسام المضادة من الطبقات مفتش والغلوبولين المناعي في الأمصال المريض يتم تحديدها من قبل حضانة مع الابيضاض اللمفاوي المصابين EBV تليها الأجسام المضادة الفلورسنت. في الفترة الحادة من المرض ، يتم تحديد الأجسام المضادة لمستضد القفيحات الفيروسي في عيار 1: 160 وما فوق.

عند استخدام عدد من النظم اختبار التجارية المستوردة في IFA يمكن تحديد ما يلي: الأجسام المضادة للالنمل الأجسام المضادة المغلف إيغان EBV لمستضد في وقت مبكر من EBV، والأجسام المضادة العام لمولدات المضادات في وقت مبكر من EBV، قرر في المرحلة الحادة من المرض وفي النواة والسيتوبلازم، والأجسام المضادة محدود EBV في وقت مبكر، تحدد في المرحلة الحادة من المرض وفي النواة والسيتوبلازم من الخلايا، يحدها الأجسام المضادة للمستضد EBV في وقت مبكر، قرر في خضم هذا المرض إلا في سيتوبلازم الخلايا، والأجسام المضادة للمستضد النووي EBV. إن استخدام أنظمة الاختبار هذه يسمح بالتشخيص التفريقي لعدد من الأمراض المرتبطة بـ EBV.

بعد ELISA إيجابي للتعرف على الأجسام المضادة EBV إعطاء مناعية استجابة تأكيد، الذي كشف عن وجود الأجسام المضادة لفصل البروتينات EBV علامة (ف البروتينات): P23، P54، P72 (وجود البروتين يوحي بإمكانية استنساخ EBV)، ص 138. سعيد تستخدم أساليب المختبر أعلاه للسيطرة على فعالية العلاج.

حساسية الأساليب الفيروسية هي 85-100 ٪ ، والنوعية هي 100 ٪ ، ووقت الدراسة 2-5 أيام. في الممارسة العملية في كثير من الأحيان ، يتم استخدام طريقة المناعي المباشر (PIF) مع الأجسام المضادة polyclonal أو وحيدة النسيلة ضد HSV-1 و HSV-2. يمكن إعادة إنتاج طريقة UIF بسهولة في المختبر السريري التقليدي ، فهي ليست مكلفة ، والحساسية أعلى من 80 ٪ ، وخصوصية 90-95 ٪. كشف الفحص المجهري المناعي وجود ضمور السيتوبلازمية ، والسمات المورفولوجية ، والنسبة المئوية للخلايا المصابة في كشط مسحات من الإحليل ، قناة عنق الرحم ، عنق الرحم ، المستقيم.

يعطي الأسلوب UIF فكرة عن الخصائص المورفولوجية للخلايا والتغيرات في توطين المستضدات HSV. بالإضافة إلى الإشارات المباشرة لتلف الخلايا بفيروس القوباء (كشف اللمعان المحدد) ، هناك علامات غير مباشرة للعدوى العقبولية وفقا لبيانات الاتحاد الدولي للفروسية:

• تجميع المادة النووية ، تقشير karyoolma ؛
• وجود ما يسمى ب. نوى "الثقوب" ، عندما يبقى واحد فقط karyolemma من نواة الخلية.
• وجود شوائب intranuclear - العجل Caudry ل.

عندما وضع الطبيب وحدة المعلومات المالية يستقبل ليس فقط الجودة، ولكن أيضا التقييم الكمي للخلايا المصابة التي كنا تستخدم لتقييم فعالية العلاج المضاد للفيروسات مع الأسيكلوفير (AC). وهكذا ، تم فحص 80 مريضا يعانون من الهربس التناسلي البسيط (GG) من قبل طريقة UIF في ديناميات. ويظهر أنه إذا قبل للعلاج مع الأسيكلوفير في مسحات كان 88٪ من المرضى على نسبة عالية من الخلايا المصابة (50-75٪ وما فوق)، بعد دورة واحدة من الأسيكلوفير في مسحات 44٪ من المرضى الذين يعانون من الخلايا السليمة الكشف عنها في 31٪ من الحالات يتم وضع علامة الخلايا المصابة الفردية و كان 25 ٪ من المرضى تصل إلى 10 ٪ من الخلايا المصابة.

محتوى الخلايا المصابة في مسحات (رد فعل PIF) من المرضى الذين يعانون من الهربس التناسلي ، يعامل مع الأسيكلوفير

فترات المرض	النسبة في المسحات
	الخلايا المصابة					الخلايا الطبيعية
	أكثر من 75٪	50-75٪	40-50٪	10٪	خلايا مفردة في n / sp
الانتكاس (قبل العلاج)	25٪	63٪	12٪
	(20)	(50)	(10)
مغفرة (بعد العلاج)				25٪	31٪	44٪
				(20)	(25)	(35)

باستخدام عدة سنوات من UIF وطريقة التهجين النقطي ، تزامنت 100٪ من الحالات مع نتائج الدراسة. وتجدر الإشارة إلى أنه من أجل زيادة موثوقية تشخيص GH، لا سيما في الحالات التي يوجد فيها الإكلينيكي وأشكال malomanifestnyh الهربس، فمن المستحسن استخدام الأسلوب 2-3 من التشخيص المختبري، وخاصة عند دراسة النساء الحوامل والنساء مع تاريخ الولادة المحرومين، والشعب مع تشخيص أمراض النساء غير محدد.

لذلك ، عند تشخيص PCR من الالتهابات الفيروسية البكتيرية في الجهاز البولي التناسلي ، فمن الضروري تقييم النتائج الإيجابية التي تم الحصول عليها مع الأخذ بعين الاعتبار الذكريات ، وجود (أو غياب) أعراض سريرية محددة للمرض. إذا تم الكشف عن الكلاميديا مع PCR ، في هذه الحالة يمكن التحدث عن العدوى وحل مشاكل العلاج وفقا لذلك. في حالة الكشف عن مسببة (ureaplasmas) ومسببات الأمراض الانتهازية، لتأكيد مطلوب التشخيص لإجراء مزيد من الدراسات والثقافة، ر. E. المواد المحاصيل من حساسية المريض للمزارع الخلايا. فقط عندما يتم الحصول على نتائج إيجابية في تحليل الثقافة يمكننا التحدث عن تأكيد مختبري لتشخيص داء الميكوبلاسما. ستسمح نفس الطريقة ، إذا لزم الأمر ، بتحديد حساسية الميكوبلازما المعزولة إلى الأشكال الطبية المستخدمة بشكل متكرر (المضادات الحيوية ، الفلوروكينولونات ، إلخ).

ربما عدوى مرحلة واحدة مع العديد من الفيروسات من عائلة Nepresviridae. وكثيرا ما اكتشفنا عدوى مريض بفيروس HSV-1 و HSV-2 و CMV. أكثر بكثير من المصابين بالعديد من فيروسات الهربس كانوا المرضى الذين يعانون من المظاهر السريرية والمخبرية من IDS الثانوي (المرضى الذين يعانون من مرض نقص السكر في الدم ، والأورام ، المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية). وهكذا ، يتبين أن الاضطرابات السريرية والمناعة التي تتطور مع الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية مصحوبة بزيادة في عدد فيروسات القوباء المكتشفة بواسطة التهجين الجزيئي. في هذا prognostically يمكن اعتبار الأكثر أهمية في الكشف على مرحلة واحدة معقدة من الحمض النووي من نوع HSV-1 ، CMV و HHV-6.

[1], [2], [3]