الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري

يعمل الدّم الوديّ كمصدر للخلايا الجذعية المكونة للدم على الإمكانات التكاثريّة وقدرات إعادة الإكتمال لخلايا المكونة للدم. وقد تبين مرارا وتكرارا أنه في وقت الولادة ، يحتوي دم الحبل السري على عدد كبير بما فيه الكفاية من الخلايا السلية المكونة للدم بشكل ضعيف ملتزم. يعتقد بعض المؤلفين أن ميزة زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري هي أنه لا توجد حاجة للبحث عن متبرع متوافق مع مستضدات HLA. وفقا لها، وعدم نضوج الأسباب نظام المناعة في الأطفال حديثي الولادة انخفض النشاط الوظيفي لخلايا مناعيا، وبالتالي أقل مما كانت عليه في زرع نخاع العظام، وحدوث رد فعل شديد "الكسب غير المشروع مقابل المضيف". في هذا بقاء زرع الخلايا من دم الحبل السري ليست أقل من خلايا نخاع العظام، وحتى في حالة استخدام عدد أقل من GSK تدار لكل 1 كجم من وزن المريض. ومع ذلك، من وجهة نظرنا، والعدد الأمثل من الأسئلة زرع خلايا دم الحبل السري اللازمة لengraftment كفاءة في جسم المتلقي، توافقها المناعية، وعدد من الجوانب الأخرى من زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم الحبل السري الدم يتطلب تحليل أكثر خطورة.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10]

الحصول على الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري

إجراءات الحصول على الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري يتطلب تناول بها بعد ولادته فورا وفصله من المشيمة، عندما المشيمة في الرحم أو الرحم السابقين، فضلا عن عملية قيصرية، ولكن أيضا الرحم السابقين. يتبين أنه في حالة انخفاض الوقت من الولادة إلى انفصال الوليد عن المشيمة إلى 30 ثانية ، فإن حجم دم الحبل السري يحصل على زيادة في المتوسط بمقدار 25-40 مل. مع إجراء لاحق ، يتم فقدان نفس كمية الدم. ثبت أن الفصل المبكر للطفل من بعد اللاحقة لا ينطوي على أي عواقب سلبية بالنسبة لحديثي الولادة.

طور معهد بحوث الروسية لأمراض الدم ونقل الدم تكنولوجيا فعالة ومنخفضة التكلفة لكل من دم الحبل السري في الأنساب الفسيولوجية ((70.2 + 25.8) مل)، والولادة القيصرية ((73.4 + 25.1) مل). وهناك طريقة لفصل دم الحبل السري مع تحقيق عائد مرتفع بما فيه الكفاية للخلايا وحيدة النواة ومنوى - (83.1 + 9.6) و (83.4 + 14.1)٪، على التوالي. طريقة محسنة لالحفظ بالتبريد من دم الحبل السري، مما يضمن سلامة عالية من الخلايا وحيدة النواة وCFU-GM - (96،8 + 5،7) و (89.6 + 22.6)٪، على التوالي. تم تحديد كفاءة طريقة تصريف عينات دم الحبل السري باستخدام حاوية "Kompoplast-300" (روسيا). سياج الكتاب دم الحبل السري أداء بعد ولادته فورا وفصله من المشيمة، من حيث وضع المشيمة في الرحم أو الرحم السابقين. قبل ثقب الوريد الحبل السري السري مرة واحدة تعامل مع 5٪ صبغة اليود، ثم مرتين - 70٪ الكحول الإيثيلي. تدفق الدم عبر الأنابيب المتصلة إلى الحاوية بشكل عفوي. لم تستغرق مدة السياج أكثر من 10 دقائق. وبلغ متوسط 66 جمعت الصرف أسلوب حجم عينات من الدم السري (72 + 28) مل، وعدد الكريات البيض في العينة بلغ متوسط الكامل - (1.1 + 0.6) س س 107. تحليل دم الحبل السري للعقم (التلوث الجرثومي، HIV-1 اكتشفت فيروس التهاب الكبد B و C، والزهري، والعدوى الفيروس المضخم للخلايا) في عينة واحدة فقط مفتش الأجسام المضادة لالتهاب الكبد C. وفي دراسة أخرى مرة واحدة المشيمة بعد أن وضعت ولادة سطح الجنين على إطار خاص بالخفض، عولج الحبل مع 5٪ من الصوديوم اليود و 75 ٪ إيثيل الكحول عشر. تم تجفيف الأوردة من الحبل السري بإبرة من نظام نقل الدم (G16). الدم ينضب في الحاوية بشكل عفوي. بلغ متوسط كمية الدم المأخوذة بهذه الطريقة (55 + 25) مل. ورقة G. Kogler وآخرون (1996) الحبل الدم المأخوذة الطريق مغلق والحصول على كميات كبيرة من الدم - في المتوسط (79 + 26) مل. يلاحظ المؤلف أن من بين 574 عينة دم الحبل تحتوي على أقل ما يقرب من 7٪ من 40 مل من الدم، الأمر الذي لا يسمح لاستخدامها للزرع. K. Isoyama وآخرون (1996)، مع الأخذ في دم الحبل السري من قبل exfusion نشطة باستخدام الحقن، وتلقى ما معدله 69.1 مل من الدم (الحبل حجم الدم تختلف 15-135 مل). وأخيرا، تم الحصول على المتعاونين A. عبد المجيد PI (1997) من خلال قسطرة الوريد punovinnoy في المتوسط 94 مل من دم الحبل السري (56-143 مل).

للحد من خطر الإصابة علاجي المنشأ وتلوث إفرازات الأمهات وضعت مغلق جمع الدم نظام يقوم على نظام transfuzioinoy تستخدم على نطاق واسع باكستر للرعاية الصحية شركة، ديرفيلد، IL (USA)، التي تحتوي على 62.5 مل من CPDA (سترات الفوسفات وسكر العنب مع الأدينين) كما تخثر. تعتبر تكنولوجيا الحصول على المادة ذات أهمية أساسية لإعداد عينة نوعية فيما يتعلق بحجم ومحتوى ونقاء تعليق الخلية. الطرق الحالية لجمع دم الحبل السري، kotoryeuslovno تصنيفها إلى مغلقة وشبه مفتوحة ومفتوحة تفضيل نظام sleduetotdavat أولا، كما هو الحال في نظام مغلق يقلل بشكل كبير من مخاطر التلوث الميكروبي للمادة، وكذلك تلوث تعليق الخلية للخلية الأم.

أجرى Nagler والمؤلفون المشاركون (1998) تحليلاً مقارناً لنجاعة جميع أنظمة أخذ عينات دم الحبل السري الثلاثة. في البديل الأول ، تم تنفيذ الإجراء في نظام مغلق عن طريق نقل الدم مباشرة إلى الحاوية. في الشكل الثاني ، تم الحصول على دم الحبل السري من خلال طريقة تسريب الدم الفعال للمحاقن 1 مع مزيد من الغسيل لأوردة المشيمة وتصريف الدم المتزامن في الحاوية (الطريقة المفتوحة). في الشكل الثالث ، تم سحب الدم في نظام شبه مفتوح عن طريق استخراجه بفعالية بواسطة المحاقن وغسله عبر شريان الحبل السري مع نقله في وقت واحد إلى الحاوية. في النسخة الأولى ، تلقى المؤلفان دم الحبل السري في الحجم (76.4 + 32.1) مل مع عدد كريات الدم البيضاء (10.5 + 3.6) × 10 ⁶ لكل 1 مل من الدم. في الشكل الثاني ، كانت المؤشرات المقابلة (174.4 + 42.8) مل و (8.8 + 3.4) × 10 ⁶ / مل. في الثلث - (173.7 + 41.3) مل و (9.3 + 3.8) × 10 ⁶ / مل. ولوحظت العدوى الأكثر شيوعاً في عينات دم الحبل السري عند استخدام نظام مفتوح. يتم تأسيس ارتباط مباشر بين كتلة المشيمة وحجم الدم المستخلص - مع زيادة كتلة المشيمة ، تزيد كمية الدم المجمعة.

بعد أخذ عينات من دم الحبل السري ، فإن خطوة الفصل تتبع عزل الخلايا أحادية النواة وتنقية تعليق الخلية من كريات الدم الحمراء. في ظل الظروف التجريبية ، يتم عزل الخلايا المنوية بواسطة طريقة ترسيبها مع ميثيل سلولوز أثناء تحلل كريات الدم الحمراء في الأمونيوم بواسطة كلوريد. ومع ذلك ، للأغراض السريرية ، لا ينبغي أن تستخدم methylcellulose ، لأن فقدان الخلايا الجذعية المكونة للدم تصل إلى 50-90 ٪. الناشر خلايا الدم الحمراء في اتصال مع كميات كبيرة من الحل العمل في العيادة أيضا قامت بالكاد بها، على الرغم من أن نسبة الفصل في هذه الطريقة الأنوية الخلايا التي تحتوي على النمط الظاهري من CD34 + والخلايا الاولية وظائف CFU-GM وCFU-GEMM أعلى بكثير. تم الإبلاغ عن وكيل جديد لعزل الخلايا أحادية النواة في كثافة الكثافة الحل المتدرج (BDS72). تحتوي هذه المادة على المعلمات الفسيولوجية التالية: pH - 7.4 ، osmolality - 280 mosm / kg ، الكثافة - 1.0720 غ / مل. وفقا للمؤلفين ، مع مساعدته فمن الممكن عزل ما يصل إلى 100 ٪ من الخلايا الإيجابية CD34 وإزالة 98 ٪ من خلايا الدم الحمراء. ومع ذلك ، فإن العيادة لا تطبق BDS72 حتى الآن.

يتم استخدام طرق الفصل اختبار خلايا الأنوية من دم الحبل السري عادة HES حل 10٪ أو 3٪ من محلول الجيلاتين. كفاءة هطول الأمطار من كريات الدم الحمراء وعزل الخلايا الأنوية في كلتا الحالتين متساوية تقريبا. ومع ذلك، في حالة استخدامها بوصفها المترسبة الجيلاتين وكيل الممكنة للحصول على عدد أكبر إلى حد ما من CFU-GM، من عند استخدام HES. ومن المفترض أن الاختلاف في كفاءة الانتعاش CFU-GM سرعة غير متكافئة بسبب ترسب الأجزاء الفردية أو الخلايا الأنوية قدرة جزيئات HES استيعابها على مستقبلات سطح الخلية المكونة للدم، وبالتالي منع حساسيتها للعوامل تحفيز مستعمرة، والتي تستخدم عند زراعة CFU-GM في المختبر. ومع ذلك ، قد يكون كل من الرسوبيين مناسبين لعزل الخلايا المنواة عند إنشاء بنوك دم الحبل السري الكبيرة الحجم.

لا تختلف طرق الفصل والحفظ بالتبريد من دم الحبل السري من حيث المبدأ عن تلك المستخدمة في العمل مع الخلايا الجذعية المكونة للدم من الدم المحيطي ونخاع العظام للمتبرعين البالغين. ولكن عند إعداد عدد كبير من عينات دم الحبل السري لمصارفها ، يجب أن تكون طرق الفصل ، أولاً وقبل كل شيء ، منخفضة التكلفة. لذلك ، الآن ، للأسف ، للاحتياجات السريرية استخدمت بالفعل طرق روتينية للعزل والحفظ بالتبريد من خلايا دم الحبل السري ، وأكثر أساليب فعالة لكنها فعالة من الناحية المالية تظل الكثير من المجربين.

بشكل عام ، تم وضع معايير لتقدير عدد الخلايا المكونة للدم ومتطلبات دراسة عينات دم الحبل السري من أجل تحديد العوامل المعدية. من أجل تأمين زرع خلايا دم الحبل السري للدم ، يجب فحص جميع عينات الدم في المقام الأول للعدوى الدموية والأمراض الوراثية. يوصي بعض الكتاب طرق خاصة إضافية من الدراسة من دم الحبل السري لغرض تشخيص الأمراض الوراثية مثل الثلاسيميا وفقر الدم المنجلي، الفوسفات نقص نازعة أمين، فقد غاماغلوبولين الدم بروتون، مرض Harlera والمقامر.

وفقا لتوصيات Ticheli L. وآخرون (1998)، في كل عينة من دم الحبل السري هو ضروري لتحديد عدد الخلايا الأنوية، خلايا SB34 إيجابية وCFU-GM، وتحمل HLA-الكتابة لتحديد فصيلة الدم ABO وره عضويتها. وبالإضافة إلى ذلك، يتم البذر البكتريولوجية والاختبارات المصلية لفيروس نقص المناعة البشرية والتهاب CMV، إختبار المستضد السطحي لإلتهاب الكبد ب، التهاب الكبد C، HTLY-I وHTLV-II (اللوكيميا تي خلية والبشرية)، والزهري، وداء المقوسات. إن تفاعل البلمرة المتسلسل مع الفيروس المضخم للخلايا وعدوى فيروس العوز المناعي البشري إلزامي.

يجب تنفيذ إجراء الحصول على دم الحبل السري بالتوافق التام مع مبادئ أخلاقيات البيولوجيا الطبية. قبل بدء جمع الدم من الضروري الحصول على موافقة المرأة الحامل لتنفيذها. إجراء مقابلة أولية مع امرأة حامل للحصول على موافقة مستنيرة لأداء جميع التلاعبات ، من الدم إلى إكمال الوثائق ، تتم فقط من قبل العاملين في المجال الطبي. لا يجوز بأي حال من الأحوال تنفيذ أي من هذه الإجراءات من قبل الموظفين الذين لديهم تعليم بيولوجي وكيميائي وصيدلاني وغير طبي آخر ، في ضوء انتهاك المعايير الراسخة لأخلاقيات علم الأحياء وحقوق الإنسان. لالتجارب الإيجابية الناقل إختبار المستضد السطحي لإلتهاب الكبد ب، أجسام مضادة للعامل المسبب لالتهاب الكبد C وفيروس نقص المناعة ومرض الزهري دم الحبل السري لم تتخذ، وعينات الدم التي تم جمعها بالفعل تجاهل وتدميرها. وتجدر الإشارة إلى أن نقل العدوى الكامنة في الأطفال حديثي الولادة هو أندر بكثير من البالغين، وبالتالي فإن احتمال نقل الدموي وتطور المضاعفات المعدية من ضخ للدم من خلايا دم الحبل السري هو أقل بكثير مما كانت عليه في حالة زرع نخاع العظم من المانحين الكبار.

من النقاط المهمة في تطبيق دم الحبل السري في العيادة هو تقييم عملية الزرع ، والتي تعتمد على تحديد عدد الخلايا الجذعية المكونة للدم في عينة دم الحبل السري و الجرعات الخلوية المطلوبة للزرع. لم يتم بعد وضع معايير للعدد الأمثل من خلايا دم الحبل السري المطلوبة للزرع. لا توجد وجهة نظر مقبولة عموما حتى على مثل هذه المعايير الروتينية مثل عدد الخلايا الإيجابية CD34 و CFU-GM. تقييم بعض الكتاب إمكانات الخلايا المكونة للدم من خلال تحليل الثقافات طويلة الأمد مع تحديد محتوى مستعمرة مشتركة لالمحببة، الكريات الحمراء، وحيدات الخلايا السوية العرطلة - CFU-GEMM.

ومع ذلك ، في التقييم السريري ، عادة ما يشتمل التقييم القياسي لزراعة دم الحبل السري على تحديد عدد الخلايا المنواة أو أحادية النواة فقط.

تخزين الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري

توجد بعض المشاكل في تكنولوجيا تخزين خلايا الدم المكونة للدم. عندما الحفظ بالتبريد من الخلايا الجذعية المكونة للدم من أجل تحقيق وضع تجميد الأمثل لابد من أن تقليل كمية من دم الحبل السري وخلايا الدم الحمراء إزالتها سابقا لتجنب انحلال الدم وخطر رد فعل التعارض مستضدات الكريات الحمراء (ABO، ره). لهذه الأغراض ، طرق مختلفة لعزل الخلايا الأنوية مناسبة. في 90 في وقت مبكر من القرن الماضي الأسلوب الأكثر استخداما على نطاق واسع لفصل الخلايا الأنوية في التدرج الكثافة على أساس Ficoll مع كثافة 1.077 غرام / مل، أو الترشيح مع الكثافة 1.080 غ / مل. الفصل دم الحبل السري عن طريق التدرج الكثافة يسمح لتحديد الخلايا في الغالب وحيدات النوى ولكن يؤدي إلى خسائر كبيرة من الخلايا المكونة للدم السلف - ما يصل إلى 30-50٪.

تقدر كفاءة الترسيب لنشاء هيدروكسي إيثيل في عملية عزل خلايا دم الحبل السري بطرق مختلفة. يشير بعض المؤلفين إلى جودة منخفضة للفصل باستخدام هذه الطريقة ، في حين أن الباحثين الآخرين ، على العكس من ذلك ، يفضلون توزيع دم حبل HSC بدقة باستخدام محلول 6٪ من نشاء هيدروكسي إيثيل. هذا يسلط الضوء على الكفاءة العالية لترسيب الخلايا المكونة للدم ، والتي ، وفقا لبعض البيانات ، تصل من 84 ٪ إلى 90 ٪.

أنصار وجهة نظر أخرى يعتقد أن عمليات تجزئة كلها تقريبا تشمل كبيرة خلايا خسائر yadrosoderzhashih وتقدم لجعل الانفصال بواسطة الطرد المركزي، التي تفصل بين دم الحبل السري إلى 3 أجزاء: كرات الدم الحمراء، خلايا الدم البيضاء والبلازما حلقة. فصل الخلايا على هذا النحو، وقد وجدت المخترعين أن محتوى الخلايا وحيدة النواة في وقت مبكر من الخلايا الاصلية المكونة للدم والخلايا مع CD34 + نمط ظاهري مناعي كانت في نهاية المطاف على التوالي 90 و 88 و 100٪ من المستوى الأصلي. كميات مماثلة من النمو تنقيته في هذا الأسلوب من خلايا دم الحبل السري التي تم الحصول عليها من قبل باحثين آخرين: بعد الترسيب الأنوية خصصت 92٪، 98٪ - وحيدات النوى، 96٪ - خلايا CD34 إيجابي و 106٪ من مستعمرة.

في أواخر التسعينيات ، كان الجيلاتين يستخدم على نطاق واسع كعامل رسوبي. في الممارسة السريرية ، بمساعدة الجيلاتين ، تم عزل الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري منذ عام 1994. عند استخدام محلول 3٪ من خلايا الأنوية الجيلاتين كفاءة الانتعاش تصل إلى 88-94٪. وقد أكد الاستخدام الواسع النطاق للجيلاتين في تطوير بنك دم الحبل السري مزاياه على عوامل الترسيب الأخرى. وأظهر تحليل مقارن لكافة الأساليب المذكورة أعلاه من عزل الخلايا الأنوية من حيث استخدام متتابعة في كل من عينات الدم اختبار الحبل الذي الخلايا وحيدة النواة المثلى sedimenter بها مع النمط الظاهري CD34 + / CD45 +، فضلا عن عدد من CFU-GM وCFU-GEMM 3٪ محلول الجيلاتين. أنه ثبت أن كثيرا أساليب أقل فعالية استخدام Ficoll التدرج الكثافة، واستخدام ميثيل السليلوز والنشا هيدروكسي الذي فقدان الخلية المكونة للدم بلغت 60٪.

ويرتبط التوسع في حجم زرع الخلايا الجذعية من دم الحبل السري ليس فقط مع تطوير أساليب لإنتاجها ، ولكن أيضا التخزين. هناك العديد من المشاكل المرتبطة مباشرة بإعداد دم الحبل السري للتخزين على المدى الطويل واختيار التكنولوجيا المثلى للحفظ بالتبريد من أجل عيناتها. ومن بين هذه القضايا ، مسألة ملاءمة تنفيذ إجراءات الفصل ، واستخدام مختلف وسائط التخزين بالبرودة ، واستخدام طرق لتحضير الخلايا المُذابة للزرع. وغالباً ما يتم نقل عينات محلية من دم الحبل السري من مناطق بعيدة عن المراكز الدموية. فيما يتعلق بهذا ، تنشأ المشكلة من الفترات المسموح بها لتخزين دم الحبل السري من لحظة استلامه إلى بداية الحفظ بالتبريد ، وهو أمر ذو أهمية خاصة في تطوير بنوك دم الحبل السري.

كشفت دراسة النشاط الوظيفي للخلايا المكونة للدم دم الحبل السري بعد تخزين طويل الأجل (حتى 12 سنة) في النيتروجين السائل أن حوالي 95٪ من الخلايا المكونة للدم خلال هذا الوقت لا تفقد القدرة التكاثري العالية. أظهرت ورقة Yurasova S. وآخرون (1997) أن دم الحبل السري تخزينها في درجة حرارة الغرفة (22 ° C) أو عند 4 درجة مئوية لمدة 24 و 48 ساعة لا يقلل بشكل كبير من بقاء الخلايا المكونة للدم أن مستوى الأولي هو مناسب 92 و 88 ٪. ومع ذلك ، إذا تم تمديد وقت التخزين إلى ثلاثة أيام ، يتم تقليل عدد الخلايا المنواة القابلة للتطبيق في دم الحبل السري بشكل ملحوظ. في الوقت نفسه ، خلال دراسات أخرى ، وجد أنه عند تخزينها لمدة 2-3 أيام عند درجة حرارة 22 أو 4 درجات مئوية ، تؤثر جدوى الخلايا المحببة الناضجة ، وليس الخلايا المكونة للدم ، بشكل أساسي.

يمكن أن تتأثر جدوى الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري بشكل سلبي من مكونات النظام لجمعها. وكشف تحليل لتأثير مضادات التخثر المختلفة، والتي من المقرر أن ربط أيونات الكالسيوم (ACD، EDTA، XAPD-1) للخلايا الاصلية المكونة للدم في ظروف تخزين دم الحبل السري بين 24 و 72 ساعة آلية عمل تأثيرها السلبي على سلامة خلايا الأنوية. وفي هذا الصدد، يوصي الكتاب على استخدام PBS (الفوسفات حل العازلة) مع إضافة الهيبارين الأصلي دون مواد حافظة بتركيز 20 U / مل، والتي، في رأيهم، يجعل من الممكن زيادة مدة تخزين غير المجزأ دم الحبل السري تصل إلى 72 ساعة، وتقي النشاط الوظيفي للمستعمرة. ومع ذلك، في دراسة صون CFU-GM وCFU-G أظهرت أن السري الوقت تخزين دم الحبل السري قبل الحفظ بالتبريد يجب أن لا تتجاوز تسع ساعات. من الواضح، في هذه الحالة يجب العمل بمبدأ أنه إذا كان هناك بيانات متضاربة يجب أن تستخدم الحد الأدنى الموصى به دم الحبل السري الحياة تخزين وبدء برمجة خلايا تجميد معزولة في أسرع وقت ممكن.

عند تجميد الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري ، عادة ما يستخدم محلول 10 ٪ من DMSO كمادة تجميليه. ومع ذلك ، بالإضافة إلى تأثير cryoprotective أعرب ، dimethylsulfoxide في هذا التركيز له تأثير سام للخلايا مباشرة ، حتى في ظل ظروف الحد الأدنى من التعرض للخلايا الدم تشكيل دم الحبل السري. للحد من التأثير السام للخلية من DMSO ، يتم تطبيق درجة حرارة التعرض صفر ، وزيادة في سرعة جميع التلاعبات والغسيل المتكرر بعد ذوبان عينات الحبل السري.

يقوم معهد علم أمراض الدم و transfusiology التابع لأكاديمية العلوم الطبية في أوكرانيا بتطوير اتجاه علمي منذ عام 1995 ، هدفه هو دراسة دم الحبل السري كمصدر بديل للخلايا المكونة للدم. على وجه الخصوص ، تم تطوير تقنيات جديدة للحفظ بالتبريد منخفضة الحرارة للخلايا المكونة للدم من دم الحبل السري غير المجزأ والمجزأ. يستخدم البولى فينيل بوليريدون ذو الوزن الجزيئى المنخفض كبروتين حرارى. تعتمد طريقة الحفظ بالتبريد من دم الحبل السري غير المجزأ على التقنية الأصلية للتحضير المسبق للخلايا للتجمد وتقنية المعالجة الخاصة للتعليق الخلوي مباشرة قبل الزرع.

واحدة من أهم العوامل التي تؤثر على مستوى النشاط الوظيفي للخلايا الجذعية المكونة للدم المكونة للدم هو معدل التبريد لتعليق الخلية ، خاصة خلال مرحلة التبلور. يوفر نهج البرمجيات لحل مشكلة السرعة ووقت التجميد فرصًا كبيرة لإنشاء طرق بسيطة وفعالة للغاية للحفظ بالتبريد ، دون غسل تعليق الخلية من الحشرات المبردة قبل الزرع.

مراحل التجميد الفوري والذوبان هي الأكثر خطورة على بقاء الخلايا أثناء إعدادها. عند تجميد الخلايا المكونة للدم ، يمكن تدمير جزء كبير منها في لحظة انتقال الوسط بين الخلايا من السائل إلى المرحلة الصلبة - التبلور. للحد من نسبة موت الخلايا ، يتم استخدام cryoprotectants ، وآليات العمل وفعالية cryoprotective التي تم تغطيتها بشكل كاف في الأدبيات العلمية.

A اعدة تقنيات التوجيه الأمثل من الحفظ بالتبريد من نخاع العظم والخلايا دم الحبل السري هو الجمع في نفس حل لتركيزات منخفضة من cryoprotectants مع عدة آليات مختلفة للعمل، على سبيل المثال، تعمل على مستوى الخلايا من DMSO والنشا هيدروكسي أو الزلال امتلاك تأثير إرفاق خارج الخلية.

لحفظ البرودة من خلايا دم الحبل السري تستخدم عادة 20٪ حل DMSO التي تثير بشكل دائم ميكانيكيا في حمام الثلج، وسكب ببطء في تعليق خلية لتحقيق يساوي (1: 1) نسبة حجم تعليق خلية وcryoprotectant. التركيز النهائي من ثنائي ميثيل السلفوكسيد هو 10 ٪. ثم يتم تبريد التعليق الخلوي على ناظم البرد مع سرعة HS / min إلى -40 ° C ، وبعد ذلك يتم زيادة معدل التبريد إلى 10 درجة مئوية / دقيقة. بعد الوصول إلى -100 درجة مئوية ، يتم وضع الحاوية مع تعليق الخلية في النيتروجين السائل (-196 درجة مئوية). مع هذه الطريقة للحفظ بالتبريد ، فإن سلامة الخلايا أحادية النواة الفعالة وظيفيا بعد ذوبان الجليد تصل إلى 85 ٪ من المستوى الأولي.

تهدف تعديلات طرق الحفظ بالتبريد إلى تقليل تركيز DMSO بإضافة نشا hydroxyethyl (تركيزات نهائية من ثنائي ميثيل سلفوكسيد ونشا hydroxyethyl هي 5٪ و 6٪ على التوالي). ويلاحظ كفاءة عالية من هذا المزيج من cryoprotectants عندما يتم تجميد تعليق خلايا الدم النخاعي ، مع أي cytoprotection أقل من مع حل واحد 10 ٪ من ثنائي ميثيل سلفوكسيد. بلغ عدد الخلايا الأنوية القابلة للنمو 96.7 ٪ من مستوى خط الأساس ، وكان نشاطها الوظيفي ، المقدر بعدد CFU-GM ، 81.8 ٪.

عند استخدام ثنائي ميثيل سلفوكسيد حل بتركيزات تتراوح بين 5-10٪ في تركيبة مع 4٪ هيدروكسي إيثيل النشا (تركيز النهائي) وجدت أن الحفاظ على خلايا CD34 إيجابي في هذه النطاقات ثنائي ميثيل سلفوكسيد دون تغيير تقريبا. في نفس الوقت ، تحت ظروف انخفاض تركيز ثنائي ميثيل سلفوكسيد من 5 إلى 2.5٪ ، لوحظ فقدان كتلة خلايا دم الحبل السري - انخفاض عدد الخلايا القابلة للحياة من 85.4 إلى 12.2٪. وخلص الكتاب الآخرين أيضا أنه كان 5 و 10٪ حل سلفوكسيد ثنائي ميثيل (في تجسيد حقوق التأليف والنشر - بالاشتراك مع مصل ذاتي) مع توفير أقصى قدر من الكفاءة cytoprotection أثناء الحفظ بالتبريد من HSC دم الحبل السري. وبالإضافة إلى ذلك، بالتتابع سلامة عالية تجميد ويتم وضع علامة خلية إذابة في حالة الجمع بين 5 أو 10٪ DMSO 4٪ محلول هيدروكسي إيثيل النشا، لا سيما في معدل التبريد رقابة من TOS / دقيقة. وفي ورقة أخرى تستخدم حل واق من البرد تتكون من ثلاثة مكونات بالفعل - DMSO، الألبومين البشري النقي وRPMI المتوسطة في نسبة 1: 4: 5، والتي تم إضافتها إلى تعليق الخلية تصل إلى نسب حجم متساوية (كان تركيز DMSO النهائية 5٪). بعد إزالة الجليد في حمام مائي عند درجة حرارة +4 درجة مئوية ، تجاوزت سلامة CFU-GM 94٪.

يقترح بعض المؤلفين استخدام دم الحبل السري غير المجزأ للحفظ بالتبريد ، حيث يتم فقدان كميات كبيرة من الخلايا المكونة للدم أثناء إزالة خلايا الدم الحمراء. في هذا التجسيد ، يتم استخدام محلول 10٪ من داي ميثيل سلفوكسيد لحماية الخلايا أحادية النواة من التأثيرات الضارة للتبلور بالتبريد. يتم إجراء التجميد عند معدل تبريد ثابت لـ HS / min إلى -80 ° C ، وبعد ذلك يتم غمر تعليق خلايا دم الحبل السري في النيتروجين السائل. باستخدام طريقة التجميد هذه ، يحدث تحلل جزئي للكريات الحمراء ، لذلك لا تتطلب عينات الدم تجزيئًا. بعد ذوبان الجليد ، يتم غسل نظام التعليق الخلوي من الهيموجلوبين الحر وثنائي ميثيل سلفوكسيد في محلول من الزلال البشري أو في مصل المريض الذاتي ويستخدم للزراعة.

الحفاظ على الخلايا الاصلية المكونة للدم بعد إزالة الجليد دم الحبل السري غير المجزأ أعلى بالفعل من مجزأة، ولكن في اتصال مع krioustoychivostyu من خلايا الدم الحمراء يمكن أن يسبب مشاكل خطيرة نتيجة للنقل بعد نقل الخلايا الحمراء ABO غير متوافق. بالإضافة إلى ذلك ، يزيد حجم الدم المخزن غير المجزأ بشكل ملحوظ. من وجهة نظر سريرية ، فإنه لا يزال من الأفضل للحفظ بالتبريد ما قبل العزل وتنقيته من أجزاء الخلايا الأخرى لخلايا دم الحبل السري للدم.

على وجه الخصوص، الأسلوب هو الحفظ بالتبريد من خلايا دم الحبل السري مجزأة السماح إزالة كريات الدم الحمراء استعدادا لتجميد، والذي يستخدم الحل 6٪ من النشا هيدروكسي في حل تكوين plazmozameshchath "Stabizol". بعد الذوبان ، يكون التعليق الخلوي المتحصل عليه جاهزًا للاستخدام السريري بدون تلاعب إضافي.

وهكذا ، في الوقت الحاضر ، هناك العديد من الطرق الفعالة للحفظ بالدم السري. والفرق الرئيسي هو أن عينات الدم المجمدة غير مجزأة أو معرضة للانفصال في أجزاء الخلايا أثناء مرحلة التحضير والخلايا الأنوية المحصودة دون اختلاط من كريات الدم الحمراء.

زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري

في أواخر الثمانينيات - أوائل التسعينيات من القرن الماضي ، تبين أن دم الحبل السري الذي يمد الجنين أثناء الحمل يتميز بنسب عالية من الخلايا الجذعية المكونة للدم. البساطية النسبية للحصول على خلايا دم الحبل السري وغياب المشاكل الأخلاقية الواضحة شجعت على استخدام الخلايا الجذعية لدم الحبل السري في الطب العملي. أول عملية ناجحة لزرع دم الحبل السري لطفل مصاب بفقر الدم Fanconi كان بمثابة نقطة البداية لتوسيع أحجام زراعة الخلايا الجذعية لدم الحبل السري وإنشاء نظام مخصص للبنك. في النظام العالمي لمصارف دم الحبل السري ، أكبرها هو مركز نيويورك للدم المشيمي ، الموجود في الميزانية العمومية للمعاهد الصحية الوطنية. عدد عينات دم الحبل السري المخزّنة في هذا البنك يقترب من 20 LLC. كما يتزايد عدد المستفيدين (معظمهم من الأطفال) ، وقد أجريت عملية زرع ناجحة. ووفقًا لوزارة الصحة الأمريكية ، فقد تجاوزت فترة عدم القدرة على الانتكاس في حياة ما بعد الزرع لمتلقي دم الحبل السري HSC بالفعل 10 سنوات.

وهذا ليس مستغربا، حيث أظهرت العديد من الدراسات عن إمكانية المكونة للدم من دم الحبل السري أن كمية ونوعية من أقرب الخلايا الجذعية ليست أقل شأنا لنخاع العظم البشري الكبار فحسب، بل أيضا من قبل بعض التدابير يتجاوز ذلك. A إمكانات التكاثري أعلى من الخلايا الجذعية من دم الحبل السري تسبب خلية يشير الميزات التنموية، وجود المستقبلات على HSCs لعوامل نمو معينة، وقدرة خلايا دم الحبل السري لautocrine إنتاج عوامل النمو، وحجم كبير وطول التيلوميرات.

وهكذا، وميزات الجينية والمظهرية من الخلايا الجذعية المكونة للدم الحبل سلفا الدم جودة عالية engraftment الانتعاش المكونة للدم المانحين المحتملين في المتلقي.

مزايا الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري

ومن فوائد حقيقية باستخدام الحبل للدم الخلايا الجذعية في الدم للزرع على مصادر أخرى من الخلايا المكونة للدم وتجدر الإشارة إلى ما يقرب من الصفر خطر على صحة المتبرع (إن لم تكن تعتبر مثل المشيمة)، في حين القضاء على الحاجة إلى التخدير العام. إن استخدام دم الحبل السري يوسع إمكانات زرع الخلايا بسبب الزراعة المتوافقة جزئيًا في نظام HLA (عدم التوافق من واحد إلى ثلاثة مولدات مضاد). تقنية التخزين على المدى الطويل من خلايا دم الحبل السري للدم في حالة تجمد، مما يزيد من احتمال الحصول نادر HLA-نوع ويقلل من وقت البحث المطابقة HLA زرع خيفي. في الوقت نفسه ، يتم تقليل خطر الإصابة ببعض أنواع العدوى الكامنة المنقولة عبر مسار النقل بشكل ملحوظ. بالإضافة إلى ذلك ، هناك شكل غير مكلف من التأمين على الحياة البيولوجية فيما يتعلق بإمكانية استخدام خلايا دم الحبل السري لعملية زرع ذاتي.

ومع ذلك، لأن كميات صغيرة من الدم التي يمكن جمعها من المشيمة (بمعدل لا يزيد عن 100 مل) على السطح مشكلة الحصول على أقصى كمية ممكنة من الدم من الوريد الحبل السري في الامتثال الصارم لشروط الحد الأدنى من المخاطر من التلوث الجرثومي من دم الحبل السري عينات المستمدة السري.

الخلايا المكونة للدم البدائية من دم الحبل السري يتم تحديدها بشكل عام من خلال وجود على CD34 glikofosfoproteina سطحها، وعلى أساس الخصائص الوظيفية عن طريق فحص فحص أو مستعمرة تشكيل مولد الرمع في المختبر. وأظهر التحليل المقارن الذي في دم الحبل السري ونخاع العظام محتوى الأقصى للخلايا وحيدة النواة-CD34 إيجابي في جزء هي على التوالي 1.6 و 5.0٪، والحد الأقصى من وحدات تشكيل مستعمرة في جزء من السكان من CD34 خلايا + - 80 و 25٪، وإجمالي كفاءة استنساخ CD34 + -cells - 88 و 58٪، الحد الأقصى للمستعمرة تشكيل خلايا ذات قدرة عالية على التكاثري (HPP-CFC في -populyatsii CD34 +) - 50 و 6.5٪. يجب أن يضاف إلى ذلك أن كفاءة استنساخ CD34 + CD38 الخلايا والقدرة على الاستجابة لتحفيز خلوى أيضا أعلى في الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري.

مزيج المستضدات المظهرية خاصتك-1، CD34 وCD45RA يؤكد قدرة عالية التكاثري من الخلايا المكونة للدم دم الحبل السري، والتعبير عن مستضدات ثلاثة على سطح خلايا الدم الحبل يدل على أنهم ينتمون إلى الخلية الجذعية. بالإضافة إلى ذلك ، ثبت أن دم الحبل السري يحتوي على خلايا ذات نمط ظاهري CD34 + لا تحتوي على علامات تمايز خطية. مستوى في الحبل القطعان خلايا الدم مع الشخصية المظهرية من CD34 + / لين ما يقرب من 1٪ من العدد الكلي للخلايا CD34 إيجابي. الخلايا الاصلية المكونة للدم تؤدي إلى دم الحبل السري بمثابة خطوط الخلايا اللمفاوية، وعدد من الخطي المحفزة تمايز الخلايا النخاعي، وهو ما يشير أيضا أنهم ينتمون إلى خلايا جذعية.

كما سبق ذكره، فإن الاختلافات الأساسية بين نخاع العظام والدم الحبل السري هي في حدود مبلغ حصلت عليها إجراءات أخذ العينات واحدة تستخدم لزرع الخلايا المكونة للدم. عندما نخاع العظام وفقدان زرع كتلة الخلية في عملية الفصل، الحفظ بالتبريد، ذوبان الجليد واختبار مباحة في حدود 40-50٪، وخلايا دم الحبل السري مثل هذه الخسارة هي كبيرة جدا، لأن عند استخدام عدد كاف من زرع HSC قد يكون لا يمكن الدفاع عنها. ووفقا لG. Kogler وآخرون (1998)، لزرع الخلايا في وزن الجسم المتلقي من 10 كلغ زرع المحتملين (العدد الكلي للعينات دم الحبل السري التي تم جمعها - 2098) قد تكون جميع عينات دم الحبل السري، ووزن الجسم 35 كجم - 67٪، وفقط و25٪ من العينات توفر زرع فعالة في المرضى الذين يعانون من وزن الجسم من 50-70 كجم. يوضح هذا الوضع السريري الحاجة إلى تطوير وتحسين فعالية أساليب أخذ العينات الموجودة، والاستنساخ وتخزين خلايا الدم الحبل السري. ولذلك، فإن مسائل توحيد طرق أخذ العينات والاختبار والانفصال والحفظ بالتبريد من دم الحبل السري والآن تناقش على نطاق واسع في الأدب لإنشاء بنوك الدم، واستخدامه في العيادة، وكذلك تهيئة الظروف وشروط تخزين الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري.

[11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]

استخدام الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري في الطب

عادة ، يمكن عزل ما يصل إلى 10 ⁶ الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري ، ونادرا ما يكون أكثر. في اتصال مع هذا ، حتى اليوم ، يبقى السؤال من الاكتفاء من العديد من خلايا الدم حبل الدم لاستعادة تكون الدم من المتلقي الكبار. تم تقسيم الآراء حول هذه القضية. يعتقد بعض الباحثين أن هذه الكمية كافية لزراعة الأطفال ، ولكن القليل جدًا لزراعة أي شخص بالغ ، حيث تكون الخلايا المثلى للإعطاء (7-10) x 10 ⁶ CD34 لكل 1 كجم من وزن الجسم في المتوسط 7 × 10 ⁸ لكل عملية زرع. ويترتب على هذه الحسابات أن عينة الحبل السري تحتوي على 700 مرة أقل من الخلايا الجذعية المكونة للدم مما هو مطلوب لزراعة شخص واحد لمريض بالغ. ومع ذلك ، يتم إجراء مثل هذا التقييم الكمي بالتشابه مع عدد الخلايا المنقول في النخاع العظمي ويتجاهل تماما الخصائص الجنينية لتكوين الدم.

على وجه الخصوص ، يتم تجاهل حقيقة وجود احتمال التكاثري أعلى من الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري مقارنة مع الخلايا السليفة المكونة للدم من نخاع العظام. تشير نتائج الدراسات حول إمكانات تكوين مستعمرات في المختبر إلى أن جرعة واحدة من دم الحبل السري يمكن أن توفر إعادة تكوين تكون الدم لدى المتلقي البالغ. من ناحية أخرى، يجب ألا ننسى أن عدد HSCs ينخفض حتى في عملية التطور الجنيني: محتوى الخلايا CD34 إيجابي في دم الحبل السري يتم تقليل خطيا 5 مرات في فترة 20 أسبوعا (الدم لدراسة تم الحصول عليها في حالة الإنهاء المبكر للحمل) إلى 40 أسبوعا من الحمل (فترة الولادة الفيزيولوجية) ، والتي يصاحبها زيادة دائمة ومتوازية في التعبير عن علامات التجلط الخلوي الخطي.

بسبب عدم وجود نهج موحد لتقدير الخلايا السلف في عينات دم الحبل السري ، يستمر الجدل حول الجرعة المثلى للخلايا الجذعية المكونة للدم في الدم. يعتقد بعض الباحثين أن عدد الخلايا المنواة والخلايا أحادية النواة ، المعاد حسابها لوزن الجسم المتلقي ، أي الجرعة ، يمكن استخدامه كمعايير لاختيار عينات الحبل السري. يعتقد بعض المؤلفين أن الحد الأدنى للعناصر الكمية للخلايا CD34 + ، حتى في إجراء زرع ذاتي لـ HSC ، هو 2 × 10 ⁶ / kg. الزيادة في جرعة من الخلايا المكونة للدم إلى 5 × 10 ⁶ خلايا / كغ (ما مجموعه 2.5) يوفر بالفعل أكثر ملاءمة لأوائل فترة ما بعد الزرع، ويقلل من حدوث مضاعفات معدية وتقصير مدة العلاج بالمضادات الحيوية الوقائية.

ووفقا لE. Gluckman وآخرون (1998) في الدم لزرع ناجحة من خلايا دم الحبل السري هو إدخال 3.7 على الأقل × 10 ⁷ خلايا الأنوية لكل 1 كجم من وزن الجسم المتلقي. مع انخفاض في الجرعة من الخلايا الجذعية المكونة للدم إلى 1 × 10 ⁷ وخلايا أنوية أقل لكل 1 كجم من وزن الجسم ، تزداد بشكل حاد مخاطر فشل الكسب غير المشروع وتكرار السرطان. ينبغي الاعتراف بأن الحد الأدنى لعدد الخلايا السلف اللازمة لتحقيق انتعاش سريع للالتهاب الدم بعد GSG transotplplation لم يعرف بعد. نظريا يمكن تحقيق ذلك باستخدام خلية واحدة، ولكن في سريري زرع نخاع العظم سريع ومستقر engraftment يضمن نقل ما لا يقل عن (1-3) × 10 ⁸ خلايا الأنوية لكل 1 كجم من وزن الجسم المريض.

شملت دراسة تفصيلية حديثة لتحديد الكمية المثلى من HSC في علم الدم الباطني مراقبة المرضى من ثلاث مجموعات معزولة اعتمادا على محتوى الخلايا الإيجابية CD34 في مادة الزرع. تلقى مرضى المجموعة الأولى (3-5) × 10 ⁶ خلايا / كغم. كانت جرعة HSC في مرضى المجموعة الثانية (5-10) × 10 ⁶ خلية / كجم ، وتلقى مرضى المجموعة الثالثة الزرع أكثر من 10 × 10 ⁶ CD34 + الخلايا / كجم. ولوحظت أفضل النتائج في مجموعة المستلمين الذين تلقوا عملية زرع مع عدد الخلايا الإيجابية CD34 تساوي (3-5) × 10 ⁶ / كجم. مع زيادة في جرعة الخلايا المزروعة فوق 5 × 10 ⁶ / كجم ، لم يتم تحديد فوائد ذات دلالة إحصائية. في الوقت نفسه ، يرتبط محتوى HSC كبير جدًا في عملية الزرع (> 10 × 10 ⁶ / كجم) بإعادة تسريب عدد كبير من الخلايا الورمية المتبقية ، مما يؤدي إلى انتكاسة المرض. لم تكن هناك علاقة مباشرة بين عدد الخلايا السلف الخلية المزروعة وتطور تفاعل "التطعيم ضد المضيف".

إن الخبرة العالمية المتراكمة لزراعة دم الحبل السري HSC تؤكد إمكانات إعادة الإعمار العالية. ويرتبط معدل engraftment من زرع دم الحبل السري مع عدد الخلايا الأنوية المقدمة. ولوحظت أفضل النتائج مع زرع 3 × 10 ⁷ / كغ ، بينما بالنسبة لنخاع العظم فإن هذه الجرعة هي 2 × 10 ⁸ / كغ. وفقا لبيانات مراكز التنسيق ، في نهاية عام 2000 تم إجراء 1200 عملية زرع خلايا دم الحبل السري في العالم ، بشكل رئيسي من أقارب المانحين (83 ٪). من الواضح أنه يجب اعتبار دم الحبل السري كبديل لنخاع العظم للزرع للمرضى الذين يعانون من داء أدمى.

ومع ذلك، حديثي الولادة الطبيعة مصدر قرطبة من الأنسجة المكونة للدم مشجعة بسبب وجود ميزات وظيفية من GCW لها. ومع ذلك، والخبرة السريرية فقط قد يعطي جوابا على السؤال لمدى كفاية لعينة من دم الحبل السري لإعادة المكونة للدم الكبار المتلقي مع عدم تنسج من الدم. يستخدم زرع خلايا دم الحبل السري في علاج العديد من أمراض السرطانية وغير السرطانية الطبيعة: اللوكيميا ومتلازمة خلل التنسج النقوي، غير هودجكين سرطان الغدد الليمفاوية، ووالعصبية، فقر الدم اللاتنسجي، فقر دم فانكوني الخلقية والماس الأسود مروحة، ونقص من التصاق الكريات البيض، ومتلازمة بار، متلازمة غونتر المرض Harlera، الثلاسيميا .

الاهتمام الدقيق والأبحاث المنفصلة يستحقان الجوانب المناعية لزرع الخلايا المكونة للدم في دم الحبل السري. ويظهر أنه في حالة زرع الخلايا الجذعية لدم الحبل السري من الجهات المانحة مع نتائج زرع المطابقة HLA غير مكتملة ومرضية تماما، أنه وفقا للمؤلفين، مما يشير إلى انخفاض دم الحبل السري مناعية من نخاع العظام.

وأظهرت دراسة تفصيلية لتكوين الخلايا من دم الحبل السري ميزات كل الطيف المظهري من الخلايا المستجيب الجهاز المناعي والنشاط الوظيفي، مما يسمح للنظر في دم الحبل السري كمصدر للHSCs مع مخاطر منخفضة نسبيا من رد فعل "الكسب غير المشروع مقابل المضيف". من بين علامات عدم النضج الوظيفي لخلايا دم الحبل السري ذات المناعة المناعية ، يجب ملاحظة وجود خلل في إنتاج السيتوكين وانخفاض في الحساسية لتنظيم الخلايا السيتوكينية للاستجابة المناعية. يعتبر تثبيط نشاط نشاط الخلايا اللمفاوية السامة عاملاً يساهم في تكوين التحمل المناعي لنسيج الدم المزروع. في السرة اللمفاوية الدم الحبل السري ، على النقيض من الدم المحيطي ونخاع العظام من المتبرعين الكبار ، والخلايا الليمفاوية غير النشطة ، والخلايا القامعة السائدة. هذا يدل على انخفاض توافر الخلايا الليمفاوية T في الحبل السري إلى الاستجابة المناعية. إحدى السمات المهمة للمجموعة الوحيدات لخلايا دم الحبل السري هي المحتوى المنخفض لخلايا عرض المستضدات الكاملة الفعّالة والفعالة.

من جهة، وانخفاض درجة نضج الخلايا المستجيب الجهاز المناعي في القراءات دم الحبل تمتد لاستخدامها في العيادة، حيث تتيح هذه الميزات لخفض حدة الصراع المناعة بين الخلايا المانحة والمتلقية. ولكن، من ناحية أخرى، ونحن نعلم من وجود علاقة بين درجة رد فعل "الكسب غير المشروع مقابل المضيف المرض" وزرع تأثير مضاد للأورام، أي تأثير على تطوير "الطعم ضد اللوكيميا". في هذا الصدد ، أجريت دراسة من السمية الخلوية المضادة للورم من خلايا دم الحبل السري. وتشير النتائج إلى أنه على الرغم من الاستجابة المناعية ضعيفة حقا من خلايا دم الحبل السري لتحفيز الأنتيجين، تفعيلها في المقام الأول هي الخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا killeropodobnymi التي تشارك بنشاط في آليات تنفيذ سمية الخلايا المضادة للورم. وعلاوة على ذلك، في القطعان اللمفاويات دم الحبل السري وعثر مع النمط الظاهري CD16 + CD56 + CD16 و"TCRa / ص +. ومن المفترض أن هذه الخلايا في شكل تنشيط تنفيذ رد فعل" الطعم ضد اللوكيميا ".

في معهد الأورام، أكاديمية العلوم الطبية في أوكرانيا كانت تدار الخلايا المكونة للدم cryopreserved من دم الحبل السري لمرضى السرطان مع نقص تنسج مستمر من الدم بسبب العلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي. في هؤلاء المرضى، وزرع الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري استعادة فعالية القمع الدموية، كما يتضح من الارتفاع المستمر لعناصر شكلت الناضجة في الدم المحيطي، وكذلك زيادة في المؤشرات التي تميز حالة المناعة الخلوية والخلطية. استقرار تأثير إعادة الإعمار بعد زرع الخلايا المكونة للدم من دم الحبل السري يسمح باستمرار الإشعاع والعلاج الكيميائي دون مقاطعة مسار العلاج. وهناك أدلة من أكبر كفاءة المزروع مرضى السرطان دم الحبل السري الخلايا الجذعية: كان خطر السنوي للتكرار وجود ورم في استخدامها 25٪ مقابل 40٪ في المرضى الذين يعانون من خيفي الجينات نخاع العظام المزروعة.

ينبغي النظر في آلية عمل الخلايا الجذعية من دم الحبل السري cryopreserved نتيجة التحفيز الخلطية متلقي الدم الناجم عن قدرة فريدة من خلايا حديثي الولادة إلى autocrine إنتاج عوامل النمو المكونة للدم، وكذلك نتيجة للengraftment مؤقت من الخلايا المانحة (كتأكيد - زيادة كبيرة في محتوى الدم المحيطي الهيموغلوبين الجنيني المتلقي 7-15 يوم بعد نقل الدم بالمقارنة مع بيانات خط الأساس). غياب في المستفيدين من دم الحبل السري ردود الفعل بعد نقل - نتيجة التسامح النسبي من الخلايا المناعية، وكذلك معيار الثقة بجدوى المواد البيولوجية cryopreserved.

الخلايا الاولية الخلايا اللمفية تي القاتل دم الحبل السري قادرة على تفعيل تحت تأثير التحفيز خلوى خارجي يستخدم لتطوير أساليب جديدة فيفو فيفو السابقين وعلى إحداث المضادة للورم الخلايا السامة للخلايا اللمفاوية عن العلاج المناعي زرع لاحق. بالإضافة إلى ذلك ، فإن "عدم نضج" الجينوم لخلايا دم الحبل السري المناعية يسمح باستخدامها لتعزيز نشاط مضاد للورم بواسطة طرق النمذجة الجزيئية.

اليوم ، وجدت دم الحبل السري تطبيق واسع في المقام الأول في أمراض الدم للأطفال. في الأطفال الذين يعانون من سرطان الدم الحاد زرع الطعم الخيفي الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري مقابل ال allografts نخاع العظام، ويقلل بشكل ملحوظ من حدوث رد فعل "الكسب غير المشروع مقابل المضيف". ومع ذلك ، هناك فترة أطول من قلة العدلات ونقص الصفيحات ، وللأسف ، مستوى أعلى من معدل الوفيات بعد الزرع 100 يوم. فترة أطول من الانتعاش في المحببة الدموية المحيطية والصفائح الدموية يمكن أن يكون راجعا إلى التمايز كافية من القطعان الفردية CD34 خلايا إيجابية من دم الحبل السري، كما يتضح من انخفاض مستوى امتصاص رودامين المشعة وانخفاض التعبير عن مستضدات CD38 على سطحها.

وفي الوقت نفسه، أظهر زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم الدم السري من المرضى البالغين، ينجز بسبب عدم وجود حد سواء متوافقة لا علاقة لها متبرع بنخاع العظام، فضلا عن فرص لحشد ذاتي HSC عالية بقاء السنوي خالية من الانتكاس في المرضى الذين تقل أعمارهم عن 30 عاما (73٪) . أدى التوسع في الفئة العمرية للمستفيدين (18-46 سنة) إلى انخفاض معدل البقاء على قيد الحياة إلى 53٪.

وأظهر التحليل الكمي من الخلايا التي تحتوي على النمط الظاهري CD34 + نخاع العظم والنخاع الدم العالي (3.5 مرة) محتواها في نخاع العظم، ولكن أظهر دم الحبل السري غلبة كبيرة من الخلايا مع الشخصية المظهري من CD34 + HLA-DR .Izvestno، علامات chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR تتكاثر أكثر نشاطا من الخلايا مع نمط ظاهري مناعي CD34 + HLA-DR +، كما أكدت في الدراسات التجريبية لنمو ثقافة على المدى الطويل من الخلايا المكونة للدم في المختبر. الأسلاف وحدة الخلية مع النمط الظاهري CD34 + CD38 الواردة في دم الحبل السري ونخاع العظام، ولكن السري خلايا دم الحبل السري مع علامة تحديد CD34 + CD38 لها النشاط مولد الرمع أعلى من الخلايا المكونة للدم من نفس النمط الظاهري، معزولة عن البالغين نخاع العظم المانحة. وبالإضافة إلى ذلك، سوف السري خلايا دم الحبل السري مع CD34 + CD38 نمط ظاهري مناعي تتكاثر ردا على التحفيز مع السيتوكينات (IL-3، IL-6، G-CSF) وإنتاج 7 مرات أكثر المستعمرات في الثقافات على المدى الطويل من خلايا نخاع العظام.

بنوك الخلايا الجذعية لدم الحبل السري

من أجل التنمية السليمة للمجال جديد من الطب العملي - زرع الخلايا الجذعية لدم الحبل السري، وكذلك لتنفيذ عمليات زرع الخلايا الجذعية نخاع العظام المكونة للدم، يجب أن يكون لديك شبكة واسعة من بنوك الدم، والتي أنشئت بالفعل في الولايات المتحدة وأوروبا. إن الشبكات الداخلية لدم دم الحبل السري متحدة من قبل اتحاد بنوك Netcord. يتم تحديد جدوى إنشاء اتحاد دولي للبنوك دم الحبل السري من حقيقة أن لأداء زرع لا علاقة لها تحتاج إلى عدد كبير من عينات من دم الحبل السري كتبته، والسماح لاختيار المانحين HLA متطابقة. فقط إنشاء نظام للبنوك مع تخزين عينات الدم من أنواع HLA المختلفة فيها يمكن أن يحل حقاً مشكلة العثور على المانح الضروري. يتطلب تنظيم مثل هذا النظام من بنوك دم الحبل السري التطوير الأولي للمعايير الأخلاقية والقانونية ، والتي تجري مناقشتها حالياً على المستوى الدولي.

لإنشاء بنوك دم الحبل السري في أوكرانيا ، من الضروري وضع عدد من الأحكام والوثائق.

بادئ ذي بدء ، هذه أسئلة حول توحيد طرق أخذ العينات ، تجزئة وتجميد دم الحبل السري. من الضروري تنظيم قواعد أخذ عينات دم الحبل السري في مستشفيات الأمومة وفقاً لمتطلبات الأخلاقيات الطبية ، لتحديد الحد الأدنى من دم الحبل السري الذي يضمن زراعة ناجحة. وينبغي مقارنة ذلك وتوحيد معايير مختلفة لتقييم جودة وعدد من الخلايا الاصلية المكونة للدم وكذلك أساليب HLA-الكتابة وطرق تشخيص الأمراض الوراثية والمعدية التي يمكن أن تنتقل عن طريق ضخ خلايا دم الحبل السري تعيين معايير الاختيار العامة المتبرعين الأصحاء. من الجدير أيضًا مناقشة إنشاء مرافق تخزين منفصلة للمصل والخلايا والحمض النووي المشتق من دم الحبل السري.

من الضروري للغاية تنظيم شبكة حاسوبية من البيانات حول دم الحبل السري من أجل تنفيذ العلاقة مع سجلات المتبرعين بنخاع العظام. لمزيد من تطوير زراعة الخلايا ، يجب تطوير بروتوكولات خاصة لمقارنة نتائج دم الحبل السري وزرع النخاع العظمي من الأقارب المتطابقين HLA والجهات المانحة غير ذات الصلة. في التعامل مع المشكلات الأخلاقية والقانونية للاستخدام السريري من خلايا دم الحبل السري يمكن أن تساعد في توحيد الوثائق، بما في ذلك الموافقة المسبقة من الآباء والأمهات، وكذلك إشعار الأم أو أقارب الطفل التي حددها الوراثية و / أو الأمراض المعدية.

فإن شرط تحديد لتطوير زراعة الخلايا في أوكرانيا هو إقرار البرنامج الوطني للتبرع للخلايا الجذعية وتنمية التعاون الدولي مع الدول الأخرى من خلال الرابطة العالمية لنخاع العظم المانحة (WMDA)، وبرنامج نخاع العظم المانحة الوطنية الأمريكية (NMDP) و غيرها.

تعميم التاريخ لا يزال أقل من لدم زرع الخلايا الجذعية من دم الحبل السري، نلاحظ أن الافتراض الأول من إمكانية التطبيق السريري من دم الحبل السري، وتقدم في 70 في وقت مبكر، وتأكدت في 80 عاما على نتائج الدراسات التجريبية على الحيوانات، وفي عام 1988 تم إجراء أول عملية زرع خلايا دموية في دم الحبل السري للإنسان في العالم ، والتي تم بعدها إنشاء شبكة عالمية من بنوك دم الحبل السري. بعد 10 عاما، بلغ عدد المرضى الذين يعانون من الخلايا المكونة للدم زرع، السري أقرب دم الحبل السري إلى 800. ومن بين هؤلاء المرضى الذين يعانون من مختلف الأمراض السرطانية (سرطان الدم، وسرطان الغدد الليمفاوية، وأورام الصلبة) وغير السرطانية (نقص المناعة الخلقية وفقر الدم والأمراض المرتبطة باضطرابات التمثيل الغذائي) الطبيعة.

في دم الحبل السري ، يكون محتوى الأسلاف الخلوية المبكرة والمرتكزة أعلى مما هو عليه في الدم المحيطي للشخص البالغ. من خلال عدد وحدات تكوين المستعمرات والبلعوم المحببة وإمكانياتها التكاثرية ، فإن دم الحبل السري يتجاوز بشكل كبير الدم المحيطي للبالغين حتى بعد إدخال عوامل النمو. في مزارع الخلايا طويلة الأجل في المختبر ، كان هناك نشاط تكاثري أكبر وجدوى خلايا دم الحبل السري من خلايا نخاع العظم. لحظات حاسمة في زرع الخلايا الجذعية دم الحبل السري وعدد والأنوية خلايا المحتملة للدم، وجود عدوى الفيروس المضخم للخلايا، المانحين HLA متوافق والمتلقي، ووزن الجسم وعمر المريض.

ومع ذلك ، ينبغي اعتبار زراعة الخلايا الجذعية من دم الحبل السري كبديل لزرع نخاع العظم من أجل علاج أمراض الدم الحادة ، وخاصة عند الأطفال. المشاكل السريرية لزرع خلايا دم الحبل السري تحل تدريجيا - هناك أساليب أخذ العينات بالفعل فعالة جدا، والانفصال والحفظ بالتبريد من خلايا دم الحبل السري، وفرت الظروف الملائمة لتشكيل بنوك دم الحبل السري، وتحسين طرق الاختبار خلايا الأنوية. يجب أن يعتبر الأمثل للفصل مع مشتريات واسعة النطاق من الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري من خلال إنشاء البنوك الحل الجيلاتين 3 ٪ و 6 ٪ من محلول هيدروكسي إيثيل.

Perehrestenko P. وآخرون (2001) نقطة عن حق إلى أن زرع الحبل الخلايا الجذعية في الدم يجب أن تأخذ مكانها الصحيح في التدابير العلاجية المعقدة للتغلب على الاكتئاب من الدم من أصول مختلفة، كما GSK دم الحبل السري تختلف في عدد من المزايا الهامة، من بينها أهمية هو السهولة النسبية للحصاد، لا يوجد خطر على المتبرع ، وانخفاض تلوث الخلايا الوليدية عن طريق الفيروسات وتكلفة منخفضة نسبيا للزرع. وتشير بعض الكتاب أن زرع خلايا دم الحبل السري أقل كثيرا من خلايا نخاع العظام يكون مصحوبا المضاعفات المرتبطة رد فعل "الكسب غير المشروع مقابل المضيف"، والذي يرجع، من وجهة نظرهم، تعبير ضعف في خلايا دم الحبل السري للمستضدات HLA-DR والخاصة عدم النضج. ومع ذلك، فإن عدد سكان الرئيسي لخلايا الأنوية من دم الحبل السري والخلايا اللمفاوية التائية (خلايا SDZ إيجابي)، مضمونها حوالي 50٪، وهو أقل بنسبة 20٪ مما كانت عليه في الدم المحيطي من الكبار، ولكن الاختلافات المظهرية من القطعان من خلايا تي من هذه المصادر غير مهمة.

من بين العوامل التي تؤثر بشكل مباشر على البقاء على قيد الحياة من زرع الخلايا الجذعية من دم الحبل السري، ينبغي أن نلاحظ عمر المرضى (ينظر إلى أفضل النتائج في المتلقين الذين تصل أعمارهم إلى 5 سنوات)، والتشخيص المبكر للمرض وشكل من أشكال سرطان الدم (كفاءة أعلى بشكل ملحوظ في سرطان الدم الحاد). أهمية كبيرة هي جرعة من خلايا الدم الحبل السري الأنوية ، فضلا عن توافق HLA مع المتلقي. وليس تحليل الحادث من الفعالية السريرية من زرع دم الحبل السري GSK في علم الأورام وأمراض الدم ويظهر على أفضل النتائج من العلاج باستخدام زرع ذات الصلة: سنة واحدة البقاء على قيد الحياة خالية من الأمراض في هذه الحالة تصل 63٪، في حين أن زرع لا علاقة لها - 29٪ فقط.

وبالتالي، فإن وجود عدد كبير من الخلايا الجذعية في دم الحبل السري وعالية القدرة repopulyatsionnaya حديثي الولادة الخلايا الجذعية المكونة للدم جعلها مناسبة لزرع خيفي في المرضى الذين يعانون من الأورام الخبيثة الدموية. ومع ذلك، لاحظ أن خلاصة من الدم بعد زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري "ويمتد في الوقت المناسب": استعادة المحتوى في العدلات الدموية المحيطية يحدث عادة في نهاية الأسبوع 6TH، وظاهرة نقص الصفيحات تختفي عادة بعد 6 أشهر. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا المكونة للدم غير ناضجة من دم الحبل السري لا يستبعد الصراع المناعي: دورة الشديد من رد فعل "الكسب غير المشروع مقابل المضيف" الحاد والمزمن لاحظ على التوالي في 23 و 25٪ من المتلقين. تم العثور على المعاودة من سرطان الدم الحاد بحلول نهاية السنة الأولى بعد زرع خلايا دم الحبل السري في 26٪ من الحالات.

[18], [19], [20], [21]