تحليل تعدد الأشكال بطول جزء التقييد

كشف الاستخدام الواسع النطاق لمختلف نوكليازات التقييد لتحليل الحمض النووي الكروموسومي عن التنوع الهائل في الجينوم البشري. حتى التغييرات الطفيفة في المناطق المشفرة والتنظيمية للجينات الهيكلية يمكن أن تؤدي إلى توقف تخليق بروتين معين أو فقدان وظيفته في جسم الإنسان، مما يؤثر عادةً على النمط الظاهري للمريض. ومع ذلك، يتكون حوالي 90% من الجينوم البشري من تسلسلات غير مشفرة، وهي أكثر تنوعًا وتحتوي على العديد مما يسمى بالطفرات المحايدة، أو تعدد الأشكال، وليس لها تعبير ظاهري. تُستخدم هذه المناطق متعددة الأشكال (المواضع) في تشخيص الأمراض الوراثية كعلامات جينية. توجد المواضع متعددة الأشكال في جميع الكروموسومات وترتبط بمنطقة محددة من الجين. من خلال تحديد موقع موضع متعدد الأشكال، يمكن تحديد الجين المرتبط بالطفرة التي تسببت في المرض لدى المريض.

لعزل مناطق الحمض النووي متعددة الأشكال، تُستخدم إنزيمات بكتيرية - إنزيمات التقييد، التي ينتج عنها مواقع التقييد. الطفرات التلقائية التي تحدث في المواقع متعددة الأشكال تجعلها مقاومة، أو على العكس، حساسة لتأثير إنزيمات تقييد محددة.

يمكن الكشف عن التباين الطفري في مواقع التقييد عن طريق تغيير طول شظايا التقييد في الحمض النووي عن طريق فصلها باستخدام الرحلان الكهربائي والتهجين اللاحق بمسبارات الحمض النووي المحددة. في حالة عدم وجود تقييد في موقع متعدد الأشكال، سيتم الكشف عن شظية كبيرة واحدة على مخططات الرحلان الكهربائي، وفي وجودها، ستكون هناك شظية أصغر موجودة. يسمح وجود أو عدم وجود موقع تقييد في مواضع متطابقة من الكروموسومات المتماثلة بوضع علامات موثوقة إلى حد ما على الجين المتحور والطبيعي وتتبع انتقاله إلى النسل. وبالتالي، عند دراسة الحمض النووي للمرضى في كلا الكروموسومين اللذين يوجد بهما موقع تقييد في منطقة متعددة الأشكال، سيتم الكشف عن شظايا قصيرة من الحمض النووي على مخطط الرحلان الكهربائي. في المرضى متماثلي الزيجوت لطفرة تغير موقع التقييد متعدد الأشكال، سيتم الكشف عن شظايا أطول، وفي المرضى متغايري الزيجوت، شظايا قصيرة وطويلة.

[ 1 ]، [ 2 ]، [ 3 ]، [ 4 ]، [ 5 ]، [ 6 ]، [ 7 ]، [ 8 ]، [ 9 ]