الدراسات المناعية في جراحة المسالك البولية

إن وصف مخطط مناعي لمريض المسالك البولية يعني أن الطبيب المعالج يشتبه في وجود اضطرابات في الجهاز المناعي. قد تكون العدوى البكتيرية والفيروسية والفطرية المتكررة، والمظاهر التحسسية، والأمراض الجهازية علامات على هذه الاضطرابات، التي تتميز بعدد من المتلازمات (المُعدية، والأورام، والحساسية، والمناعة الذاتية، والتكاثر اللمفي). قد يُصاب المريض الواحد بعدة متلازمات. على سبيل المثال، يمكن أن تُسبب الأمراض المعدية المزمنة (المتلازمة المعدية) نقص المناعة، ويمكن أن يظهر نقص المناعة كاستعداد للإصابة بالأمراض المعدية والأورام (المتلازمة الورمية). قد يحدث الاستعداد للإصابة بالعدوى على خلفية نقص المناعة الثانوي، الذي يتطور نتيجة لمرض تكاثري لمفي، مثل سرطان الدم. هناك ثلاث مجموعات رئيسية من التغيرات المرضية في الجهاز المناعي:

• نقص كمي أو وظيفي في أحد أو أكثر من روابط الجهاز المناعي، مما يؤدي إلى تطور حالة نقص المناعة؛
• اضطراب في التعرف على المستضدات بواسطة الجهاز المناعي، مما يؤدي إلى تطور العمليات المناعية الذاتية؛
• استجابة مناعية مفرطة النشاط أو "منحرفة"، تتجلى في ظهور الأمراض التحسسية.

هناك طرقٌ للتشخيص المناعي، منها الفحص (اختبارات المستوى الأول) والتوضيح (اختبارات المستوى الثاني). تُستخدم الأولى لتسجيل اضطرابات الجهاز المناعي، بينما تُستخدم الثانية لتحديد الآليات المسؤولة عن تطبيقها بهدف تحسين المناعة.

مناعة الخلايا البائية

طرق الفحص

• تحديد العدد النسبي والمطلق للخلايا اللمفاوية البائية باستخدام الفلورسنت المناعي أو قياس التدفق الخلوي باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة لمستضدات الخلايا البائية (CD19، CD20، حيث CD هي مجموعات التمايز). يتراوح المحتوى الطبيعي للخلايا اللمفاوية البائية لدى البالغين بين 8% و19% من إجمالي عدد الكريات البيضاء، أي ما بين 190 و380 خلية/ميكرولتر. تزداد نسبة الخلايا اللمفاوية البائية في حالات العدوى البكتيرية والفطرية الحادة والمزمنة، وأمراض الكبد المزمنة، وأمراض النسيج الضام الجهازية، وسرطان الدم الليمفاوي المزمن، والورم النقوي.
• تحديد تركيز الغلوبولينات المناعية غير النوعية (F، M، G، E) باستخدام الانتشار المناعي الشعاعي البسيط، أو قياس الكُلى أو قياس التربومتري، أو المقايسة المناعية الإشعاعية، أو المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA). القيم الطبيعية للبالغين: الغلوبولين المناعي (Ig) A 0.9-4.5 غ/ل. الغلوبولين المناعي M 0.3-3.7 غ/ل. الغلوبولين المناعي G 8.0-17 غ/ل. تزداد تركيزات الغلوبولينات المناعية في الحالات المرضية نفسها التي تزداد فيها نسبة الخلايا الليمفاوية البائية. ينخفض تركيز الغلوبولينات المناعية في حالات نقص غاما غلوبولين الدم الخلقي، وأورام الجهاز المناعي، واستئصال الطحال، وفقدان البروتين، وأمراض الكلى أو الأمعاء، والعلاج بمضادات التكاثر الخلوي ومثبطات المناعة.

طرق التوضيح

• تحديد المركبات المناعية الدائرية في الدم عن طريق الترسيب الانتقائي في بولي إيثيلين جليكول، متبوعًا باختبار الكثافة الطيفية الضوئية (المستوى الطبيعي ٨٠-٢٠ وحدة). تُعد زيادة المركبات المناعية الدائرية نموذجية للعدوى البكتيرية والفطرية والفيروسية الحادة، وأمراض المناعة الذاتية، وأمراض المجمعات المناعية، وداء المصل، وردود الفعل التحسسية من النوع الثالث.
• تحديد الغلوبولينات المناعية النوعية في الدم فيما يتعلق بالمستضدات البكتيرية والفيروسية، وحمض الديوكسي ريبونوكلييك (DNA) في أمراض المناعة الذاتية، والكشف عن الأجسام المضادة للحيوانات المنوية (العقم المناعي الذاتي) والأجسام المضادة للكلى (التهاب الحويضة والكلية والتهاب كبيبات الكلى) عن طريق الانتشار المناعي الشعاعي أو طريقة ELISA.
• تحديد الأجسام المضادة للحيوانات المنوية في الحيوانات المنوية [اختبار MAR (تفاعل الجلوبولين المختلط)]، طبيعي - نتيجة سلبية.
• تحديد تركيز الغلوبولينات المناعية في البول لغرض التشخيص التفريقي بين التهاب الحويضة والكلية والتهاب كبيبات الكلى (انتقائية البول البروتيني).
• تحديد محتوى IgE في عصير البروستاتا لغرض تشخيص التهاب البروستاتا التحسسي باستخدام طريقة الانتشار المناعي الشعاعي أو ELISA.
• دراسة الاستجابة في تفاعل تحول الخلايا الليمفاوية البائية الانفجاري إلى ميتوجين الخلايا البائية (ميتوجين نبات البوكويد لتحفيز تفاعل تحول الخلايا الليمفاوية البائية الانفجاري في وجود الخلايا الليمفاوية التائية)، والقيمة المعيارية لها هي 95-100%.

ارتباط الخلايا التائية بالمناعة

طرق الفحص

• تحديد العدد النسبي والمطلق للخلايا اللمفاوية التائية الناضجة CD3 عن طريق تفاعل الفلورسنت المناعي أو قياس التدفق الخلوي باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة لـ CD3. المعدل الطبيعي للبالغين هو 58-76% أو 1100-1700 خلية/ميكرولتر. يُعد انخفاض عدد الخلايا اللمفاوية التائية مؤشرًا على قصور الرابط الخلوي للمناعة. يُعد هذا أمرًا شائعًا في بعض حالات نقص المناعة الثانوية والأولية (الالتهابات البكتيرية والفيروسية المزمنة: السل، ومتلازمة نقص المناعة المكتسب، والأورام الخبيثة، والفشل الكلوي المزمن، والإصابات، والإجهاد، والشيخوخة، وسوء التغذية، والعلاج بالخلايا الخلوية، والتعرض للإشعاع المؤين). تحدث زيادة في عدد الخلايا اللمفاوية التائية على خلفية فرط النشاط المناعي أو في أمراض تكاثر الخلايا اللمفاوية. في حالة الالتهاب، يزداد عدد الخلايا اللمفاوية التائية أولاً ثم ينخفض. يشير عدم وجود انخفاض في الخلايا اللمفاوية التائية إلى عملية التهابية مزمنة.
• تقييم مجموعات الخلايا الليمفاوية الفرعية.
  • تحديد عدد الخلايا التائية المساعدة (أجسام مضادة لـ CD4). عادةً ما يتراوح بين 36% و55% أو 400 و1100 خلية/ميكرولتر. تزداد أعداد هذه الخلايا في أمراض المناعة الذاتية، وداء والدنستروم، وتنشيط المناعة ضد زراعة الأعضاء؛ بينما ينخفض عددها في حالات العدوى البكتيرية والفيروسية والطفيلية المزمنة، والسل، ومتلازمة نقص المناعة المكتسب، والأورام الخبيثة، والحروق، والإصابات، وسوء التغذية، والشيخوخة، والعلاج بمضادات التكاثر الخلوي، والتعرض للإشعاع المؤين.
  • تحديد عدد مثبطات الخلايا التائية (أجسام مضادة لـ CD4). عادةً ما تكون النسبة 17-37% أو 300-700 خلية/ميكرولتر. تزداد أعداد مثبطات الخلايا التائية في نفس الظروف التي ينخفض فيها عدد الخلايا التائية المساعدة، ويقل عددها في نفس الظروف التي يزداد فيها عدد الخلايا التائية المساعدة.
  • مؤشر تنظيم المناعة CD4/CD8، عادةً ما يكون بين 1.5 و2.5. فرط النشاط بقيم أعلى من 2.5 (أمراض الحساسية والمناعة الذاتية)؛ قلة النشاط - أقل من 1.0 (استعداد للإصابة بالعدوى المزمنة). في بداية العملية الالتهابية، يرتفع مؤشر تنظيم المناعة، وعندما يهدأ، يعود إلى مستواه الطبيعي.

طرق التوضيح

• تحديد عدد الخلايا القاتلة الطبيعية (الخلايا القاتلة الطبيعية) - الأجسام المضادة لـ CD16 وCD56. المعدل الطبيعي للخلايا الليمفاوية CD16 هو 6-26%، وللخلايا الليمفاوية CD56 هو 9-19%. يزداد عدد الخلايا القاتلة الطبيعية عند رفض عملية الزرع، وينخفض في حالات العدوى الفيروسية، والسرطان، ونقص المناعة الأولي والثانوي، والحروق، والإصابات، والإجهاد، والعلاج بالمضادات الخلوية، والتعرض للإشعاع المؤين.
• تحديد عدد الخلايا الليمفاوية التائية الحاملة لمستقبلات الإنترلوكين-2 (علامة التنشيط) - أجسام مضادة لـ CD25. المعدل الطبيعي هو 10-15%. يُلاحظ ارتفاع في عددها في الأمراض التحسسية، ورفض زراعة الأعضاء، والاستجابة لمستضدات الغدة الزعترية في الفترة الحادة من العدوى الأولية، وانخفاض في نفس الأمراض التي ينخفض فيها عدد الخلايا القاتلة الطبيعية.
• دراسة التعبير عن علامة التنشيط - جزيء التوافق النسيجي من الفئة الثانية HLA-DR. يزداد التعبير في العمليات الالتهابية، لدى مرضى التهاب الكبد الوبائي سي، وداء الاضطرابات الهضمية، والزهري، وأمراض الجهاز التنفسي الحادة.
• تقييم موت الخلايا الليمفاوية المبرمج. يمكن تحديد جاهزية الخلايا الليمفاوية للموت المبرمج من خلال التعبير عن مستقبل Fas (CD95) على سطحها والجين الأولي للورم bd-2 في الميتوكوندريا. يُقيّم موت الخلايا الليمفاوية المبرمج بمعالجتها بصبغتين فلوريتين: يوديد البروبيديوم، الذي يرتبط بشظايا الحمض النووي، وأنيكسين Y، الذي يرتبط بالفوسفاتيديل سيرين، الذي يظهر على غشاء الخلية عند بدء الموت المبرمج. تُقيّم النتائج باستخدام مقياس التدفق الخلوي الفلوري. تُحسب النتائج بناءً على نسبة الخلايا المصبوغة بأصباغ مختلفة. الخلايا غير المصبوغة قابلة للحياة، بينما تُعدّ الخلايا المرتبطة فقط بأنيكسين Y من المظاهر المبكرة للموت المبرمج، بينما يُعدّ يوديد البروبيديوم وأنيكسين Y من المظاهر المتأخرة للموت المبرمج، بينما يُشير التلوين بيوديد البروبيديوم فقط إلى النخر.
• تقييم تكاثر الخلايا الليمفاوية التائية في المختبر.
  • تغيرات في تكوين الخلايا الأرومية - تفاعل تحويل الخلايا الليمفاوية الأرومية. تُحضّن الكريات البيضاء مع أي مُولِّد ميتوجين من أصل نباتي (ليكتينات). يُستخدم في أغلب الأحيان الفايتوهيماغلوتينين لمدة 72 ساعة، ثم تُؤخذ عينة وتُصبغ ويُحسب عدد الخلايا الأرومية! مؤشر التحفيز هو نسبة الخلايا المتحولة في التجربة (الزراعة باستخدام الفايتوهيماغلوتينين) إلى نسبة الخلايا المتحولة في المجموعة الضابطة (الزراعة بدون الفايتوهيماغلوتينين). يمكن تقييم تفاعل تحويل الخلايا الليمفاوية الأرومية بإضافة وسم مشع (ZN-thymndinum) إلى الخلايا المزروعة، حيث يزداد تخليق الحمض النووي أثناء انقسام الخلايا. تحدث اضطرابات في الاستجابة التكاثرية في كل من حالات نقص المناعة الأولية والثانوية المرتبطة بالعدوى والسرطان والفشل الكلوي والتدخلات الجراحية.
  • في هذه الدراسات، يُقيَّم التعبير عن علامات التنشيط (CD25، مستقبل الترانسفيرين - CD71) وجزيء معقد التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الثانية HLA-DR، والتي تكاد تكون غائبة في الخلايا اللمفاوية التائية الساكنة. تُحفَّز الخلايا اللمفاوية التائية باستخدام الراصة الدموية النباتية، وبعد 3 أيام، يُحلَّل التعبير عن علامات التنشيط بطريقة التفاعل المناعي المباشر أو غير المباشر، وقياس التدفق الخلوي الفلوري، باستخدام أجسام مضادة وحيدة النسيلة للمستقبلات المعزولة.
  • قياس كمية الوسائط المُصنّعة بواسطة الخلايا اللمفاوية التائية المُنشّطة [الإنترلوكين (IL) 2، IL-4، IL-5، IL-6، γ-إنترفيرون، إلخ] باستخدام المقايسة المناعية الإشعاعية أو ELISA. ومن الأهمية بمكان تقييم تركيز γ-إنترفيرون وIL-4 كمؤشرات لـ Th1 وTh2 في السائل العلوي للمزارع المُنشّطة وداخل الخلية. ومن المفيد، إن أمكن، تحديد التعبير الجيني للسيتوكين المُقابل من خلال مستوى حمض الريبونوكلييك المصفوفي في الخلية المُنتجة وكثافة التعبير عن مُستقبلات السيتوكينات المُقابلة.
    
• تفاعل تثبيط هجرة الخلايا الليمفاوية. تُفرز الخلايا الليمفاوية التائية المُحسَّسة، عند تفاعلها مع المستضد، لمفوكينات، بما في ذلك عوامل تُثبِّط هجرة الخلايا الليمفاوية. تُلاحَظ ظاهرة التثبيط عند إدخال المُولِّدات في مزرعة الخلايا. يُمكِّننا تقييم درجة التثبيط من تقييم قدرة الخلايا الليمفاوية على إفراز السيتوكينات. عادةً، يتراوح تواتر الهجرة، حسب المُولِّد المُحدَّد، بين 20% و80%.
• تقييم سمية الخلايا القاتلة الطبيعية. تُحدَّد قدرة الخلايا القاتلة الطبيعية على قتل الخلايا المستهدفة من سلالة الكريات النخاعية الحمراء K-562. في حال تقييم السمية المعتمدة على الأجسام المضادة، تُستخدم الخلايا المستهدفة المغلفة بأجسام مضادة من النوع IgG. تُوسم الخلايا المستهدفة بـ 3H-يوريدين وتُحضَّن مع الخلايا المؤثرة. يُقيَّم موت الخلايا المستهدفة بإطلاق المادة المشعة في المحلول. يحدث انخفاض في السمية في الأورام الخبيثة. في بعض الحالات، عندما يكون من الضروري التنبؤ بفعالية العلاج بالإنترلوكينات، تُقيَّم سمية الخلايا القاتلة الطبيعية أثناء الحضانة مع بعض السيتوكينات.

دراسة وظيفة الخلايا البلعمية

طرق الفحص

دراسة شدة امتصاص الخلايا الميكروبية بواسطة الخلايا البلعمية (بلعمة جزيئات اللاتكس، وزراعة اختبارية لبكتيريا المكورات العنقودية، والإشريكية القولونية، أو الكائنات الدقيقة المعزولة من المريض). عن طريق الطرد المركزي للدم المُعالج بالهيبارين، يُعزل مُعلق كريات الدم البيضاء، ويُضاف مصل فصيلة الدم الوريدي لعملية البلعمة (الأوبسونينات هي بروتينات تُعزز البلعمة). يُخفف المُعلق الميكروبي، ويُخلط مع كريات الدم البيضاء، ويُحضّن لمدة 120 دقيقة، وتُؤخذ عينات للتحليل بعد 30-120 دقيقة من بدء الحضانة. تُصنع لطاخات من مُعلق كريات الدم البيضاء المُجمع. تُحدد مؤشرات البلعمة التالية:

• مؤشر البلعمة - النسبة المئوية للخلايا التي دخلت البلعمة خلال 30 دقيقة و120 دقيقة من الحضانة؛ القيمة القياسية لمؤشر البلعمة (30) هي 94%، ومؤشر البلعمة (120) هو 92%؛
• العدد البلعمي - متوسط عدد البكتيريا الموجودة داخل الخلايا؛ القيمة القياسية للعدد البلعمي (30) هي 11%، والعدد البلعمي (120) هو 9.8%؛
• معامل العدد البلعمي - نسبة العدد البلعمي (30) إلى العدد البلعمي (120)؛ عادة 1.16؛
• مؤشر قتل البكتيريا المتعادلة - نسبة عدد الميكروبات المقتولة داخل الخلايا البلعمية إلى العدد الإجمالي للميكروبات الممتصة؛ عادة 66%.

طرق التوضيح

• دراسة قدرة الخلايا البلعمية على قتل البكتيريا في اختبار النيتروبلو تترازوليوم (NBT) - اختبار NBT. تُضاف صبغة النيتروبلو تترازوليوم الصفراء إلى كريات الدم البيضاء. عندما تمتص العدلات الصبغة، تحدث عملية اختزال تحت تأثير جذور الأكسجين الحرة، مما ينتج عنه تلوين أزرق. يتم إجراء التفاعل في صفيحة مسطحة القاع ذات 96 بئرًا. يُضاف محلول هانكس (NBT التلقائي) إلى الآبار الثلاثة الأولى مع خليط من NBT وكريات الدم البيضاء، وتُضاف جزيئات اللاتكس إلى الثانية؛ يُحضن الخليط عند 37 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة. تُقرأ النتائج عند 540 نانومتر على قارئ ويُعبر عنها بوحدات عشوائية. يُحسب معامل التحفيز (K _st )، وهو يساوي نسبة الكثافة الضوئية في الآبار المحفزة إلى متوسط الكثافة الضوئية في الآبار بدون تحفيز. في الأشخاص الأصحاء، _spont NBT = 90 ± 45 CU، NBT _stim = 140 ± 60 CU. ك _ست = 1.78±0.36.
• دراسة جزيئات الالتصاق. يُستخدم قياس التدفق الخلوي الفلوري لتحديد التعبير عن مستضدات السطح CD11a/CD18، CD11b/CD18، CD11c/CD18. تتجلى أعراض نقص المناعة المصحوب بضعف الالتصاق في تكرار العدوى، وبطء التئام الجروح، وغياب القيح في بؤر العدوى.

دراسة النظام المكمل

طرق الفحص

تحديد النشاط الانحلالي للمتممة هو دراسة للمسار التقليدي لتنشيط المتممة. تُضاف تخفيفات مختلفة من مصل شخص مريض وآخر سليم إلى كريات الدم الحمراء الكبش المغلفة بأجسام مضادة. وحدة النشاط الانحلالي هي مقلوب تخفيف المصل الذي تُدمر عنده 50% من كريات الدم الحمراء. تُقدر درجة انحلال الدم ضوئيًا بإطلاق الهيموغلوبين في المحلول. يُلاحظ انخفاض في النشاط الانحلالي للمتممة في الذئبة الحمامية الجهازية المصحوبة بتلف الكلى، والتهاب كبيبات الكلى الحاد، ونقص المناعة المشترك، والوهن العضلي، والتهاب الكبد الفيروسي، والأورام اللمفاوية، وزيادة في اليرقان الانسدادي، والتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو، والروماتيزم، والتهاب المفاصل الروماتويدي، والتهاب الشرايين العقدي، والتهاب الجلد والعضلات، واحتشاء عضلة القلب، والتهاب القولون التقرحي، ومتلازمة رايتر، والنقرس.

طرق التوضيح

• تحديد مكونات المتممة. يُجرى التحديد الكمي باستخدام الانتشار المناعي الشعاعي وقياس النفلومتري.
  لا تُعدّ الدراسة مفيدة إلا إذا تغيرت الخصائص المستضدية لمكونات المتممة.
• ثبت أن مُكوِّن Clq في المُتمِّم يُعزِّز عملية البلعمة ويُؤثِّر على السمية الخلوية. ويحدث انخفاضه في أمراض المُعقَّد المناعي، والذئبة الحمامية الجهازية، والالتهابات القيحية، والأورام.
• يشارك المكون C3 في تنشيط مسارات المتممة التقليدية والبديلة. ويرتبط انخفاض تركيزه بالعدوى البكتيرية والفطرية المزمنة، ووجود معقدات مناعية دائرية أو نسيجية.
• يشارك المكون C4 في تنشيط المسار الكلاسيكي. يرتبط انخفاض تركيزه بإطالة تنشيط المتمم بواسطة المعقدات المناعية، وانخفاض تركيز مثبط C1، الذي يتحكم في تنشيط المسار الكلاسيكي. يحدث نقص C4 في الذئبة الحمامية الجهازية، بينما تحدث زيادة في C4 في أمراض الكلى، ورفض زراعة الأعضاء، والالتهابات الحادة، وأمراض الجهاز الهضمي.
• C5a هو جزء صغير من جزيء C5، ينفصل عنه نتيجةً لتنشيط نظام المتممات. يزداد تركيزه في حالات الالتهاب، وتسمم الدم، والأمراض الأتوبية، والحساسية.
• مثبط الكلوريد C1 عامل متعدد الوظائف. فهو يتحكم في تنشيط مكون المتمم C1، ويمنع نشاط الكاليكرين والبلازمين وعامل هاجمان المنشط، وCls، وبروتينات الأوردة. يؤدي نقص مثبط الكلوريد C1 إلى الوذمة الوعائية.
• دراسات وظيفية للمتممة. يُضاف مصل الاختبار إلى مصل قياسي خالٍ من أي مكون من مكونات المتممة، ويُحدَّد النشاط الانحلالي للمتممة. إذا لم يُستعاد النشاط الانحلالي إلى طبيعته، يُعتبر نشاط هذا المكون في مصل الاختبار منخفضًا.

[ 1 ]، [ 2 ]، [ 3 ]، [ 4 ]، [ 5 ]، [ 6 ]