تشخيص الهربس

يعتمد تشخيص الهربس على عزل الفيروس الكلاسيكي في مزارع الخلايا الحساسة، والطرق المناعية الفلورية والطرق المصلية، والفحص المهبلي، واستخدام الطرق البيولوجية الجزيئية الحديثة (تفاعل البوليميراز المتسلسل، التهجين النقطي)، مما يسمح بتشخيص المجموعة الكاملة من فيروسات الهربس، بما في ذلك أنواع HHV-6 و HHV-7.

طرق التشخيص المختبرية لعدوى الهربس

الطرق الرئيسية التي تهدف إلى عزل فيروس الهربس البسيط أو الكشف عن الجسيمات الفيروسية و/أو مكوناتها	طرق مساعدة تهدف إلى الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس الهربس البسيط في السوائل البيولوجية لجسم الإنسان
عزل فيروس الهربس البسيط في الخلايا الحساسة ومزارع الحيوانات المجهر الإلكتروني المباشر والمناعي المتغيرات المباشرة وغير المباشرة لـ IPA ايفا الأساليب البيولوجية الجزيئية تفاعل تكتل اللاتكس	تفاعل التحييد شركة آر إس سي تحديد الأجسام المضادة للبروتينات غير البنيوية لفيروس الهربس البسيط من النوع 1،2

تبيّن أن الهربس التناسلي (GH) يُسببه فيروس الهربس البسيط من النوع الثاني (HSV-2) لدى 76% من المرضى، بينما يُسببه فيروس الهربس البسيط من النوع الأول (HSV-1) لدى 24% منهم. علاوة على ذلك، لم يُلاحظ وجود عدوى أحادية لفيروس الهربس التناسلي إلا لدى 22% من المرضى، بينما كُشف عن ارتباطات ميكروبية في 78% من الحالات. في 46% من الحالات، كُشف عن داء الطفيليات الناتج عن نوعين من مُسببات الأمراض، بما في ذلك الكلاميديا في 40% من الحالات. وكانت الإصابة بالغاردنريلا والتريكوموناس والمكورات البنية أقل شيوعًا في مسحات المهبل.

في 27% من المرضى، مُثِّلت ثلاثة مسببات مرضية بداء الطفيليات، وفي 5.2% بأربعة مسببات مرضية. علاوة على ذلك، لوحظ في أغلب الأحيان وجود مزيج من الكلاميديا مع فطريات الغاردنريلا والمبيضات. تُبرهن هذه البيانات على ضرورة إجراء فحص بكتيري شامل لمرضى GH لتحديد مجموعات العوامل الممرضة، بالإضافة إلى دراسة متعمقة لآلية تطور العدوى المختلطة في الجهاز البولي التناسلي، مما يسمح بعلاج مُركَّب ومتمايز لعدوى الهربس.

المواد التي تمت دراستها لعزل فيروس الهربس البسيط اعتمادًا على موقع الآفات الهربسية

تحديد موقع الآفات	محتويات الحويصلة	كشط الخلايا				السائل الدماغي الشوكي	شفط القصبات الهوائية	خزعة	دم
		1	2	3	4
جلد	+								+
عيون			+						+
الأعضاء التناسلية				+					+
فتحة الشرج	+				+				+
فم	+	+							+
الجهاز العصبي المركزي	+					+		+	+
الرئتين		+					+		+
الكبد								+	+
الهربس الخلقي	+	+	+				+		+

طرق التشخيص المختبري لعدوى الفيروس المضخم للخلايا

طُرق	الوقت المطلوب للحصول على النتائج	ملحوظات
علم الفيروسات
المجهر الإلكتروني	3 ساعات	ليس من السهل الوصول إليه
عزل الفيروس في مزرعة الخلايا (VCI)	4-20 يومًا	قياسي، بطيء
التلوين المناعي الفلوري لمرض التهاب المفاصل الروماتويدي المبكر باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة	6 ساعات	أقل تحديدا
خلوي	2-3 ساعات	أقل تحديدا
مصلية
شركة آر إس سي	يومين	معيار
آر جي إيه	يوم واحد	كثيف العمالة
الشعاب المرجانية	6 ساعات	بسيطة ومحددة
صندوق الاستثمار الوطني	6 ساعات	صعب
ريمب	6 ساعات	صعب
اختبار ELISA (IgM، DO)	6 ساعات	سريع وبسيط
لطخة مناعية	6 ساعات	غالي
البيولوجيا الجزيئية
إم جي	5-7 أيام	باهظة الثمن وتتطلب جهدا مكثفا
تفاعل البوليميراز المتسلسل	3 ساعات	غالي

طرق تشخيص فيروس الهربس النطاقي

طرق التشخيص	تقنيات المختبر
غير مباشر
اختيار	زراعة الأنسجة، أجنة الدجاج، الحيوانات المعملية، الزراعة المشتركة مع الخلايا المسموحة أو الفيروسات المساعدة
تحديد العزلات	تفاعل التحييد، RSC، IF، PIEF، تفاعل ترسيب العزلات، التكتل، IF
مباشر
علم الخلايا	اللطاخات: المناعة الفلورية الملونة
علم الأنسجة	مورفولوجيا أمراض الخلية
بناء	المجهر الجنيني، المجهر الإلكتروني المناعي
تحديد المستضدات	IF، PIEF، RIM، IFA
تحديد إنتاج الأجسام المضادة المحلية	Ig M، Ig G، Ig A: ELISA، RIA
المناهج البيولوجية الجزيئية	التهجين الجزيئي، تفاعل البوليميراز المتسلسل

التشخيص المختبري للعدوى الناجمة عن فيروس الهربس النطاقي

مشاكل التشخيص	طُرق	النتائج المتوقعة
العدوى الأولية الحادة	1	الكشف خلال ساعتين
	2	مستويات الأجسام المضادة ترتفع ببطء
	3	موجود بعد 3 أيام من الإصابة
العدوى المعاد تنشيطها الحادة	1	اكتشاف UUU بعد ساعتين
	2	مستويات الأجسام المضادة ترتفع ببطء
	4	موجود بعد 4 أيام من ظهور الطفح الجلدي

1. تحديد حويصلات VEGF في السائل؛
2. علم الأمصال: CSC، ELISA، يهدف إلى الكشف
3. علم المصل: اختبار ELISA يهدف إلى الكشف عن IgM؛
4. علم المصل: اختبار ELISA يهدف إلى الكشف عن IgA و IgM.

طرق الإشارة إلى الاستجابة المناعية لعدوى فيروس الهربس النطاقي

يقترب	طريقة
الكشف عن زيادة في مستوى الأجسام المضادة في المصل الثاني	تفاعل تحييد RSK، RTGA، RPGA، IF، RIM، ELISA
الكشف عن الأجسام المضادة الخاصة بفئتي Ig G و Ig A في عينة المصل الأولى	ELISA، IF، RIM، تراص اللاتكس

تفسير نتائج الفحص المصلي لمصل المرضى للكشف عن عدوى فيروس الهربس (ELISA)

اسم العدوى/العلامة	متوسط قيم العتبة للعدوى
	نتائج التحليل	تفسير
تضخم الخلايا IgG المضاد لفيروس تضخم الخلايا (1-20 وحدة/مل) IgM المضاد لـ CMV (100-300%)	إيجابي 1-6 إيجابي 6-10 إيجابي >10 سلبي إيجابي 100-300 سلبي <90 مشكوك فيه 90-100	الهدأة تفاقم المرض المرحلة الحادة من المرض عدم وجود عدوى (مرض) المرحلة الحادة من المرض كرر التحليل بعد 2-3 أسابيع
فيروس الهربس البسيط من النمط المصلي 1،2 مضاد لفيروس الهربس البسيط 1/2 إجمالي (100-900%)	إيجابي 100-400 إيجابي 400-800 إيجابي >800 سلبي <100	هدأة تفاقم المرض المرحلة الحادة من المرض عدم وجود عدوى (مرض)

يقدم الجدول الطرق الرئيسية لتشخيص عدوى فيروس الهربس في المختبر، بالإضافة إلى المواد البيولوجية الموصى بها والتي يتم فحصها عند عزل فيروس الهربس البسيط، مع الأخذ في الاعتبار توطين الآفات الهربسية.

عزل فيروسات الهربس البسيط والفيروس المضخم للخلايا بشكل موثوق عن طريق إصابة مزارع خلايا حساسة. وهكذا، خلال الفحص الفيروسي لـ 26 مريضًا خلال فترة الانتكاس، تم عزل فيروس الهربس البسيط من مزرعة خلايا فيرو حساسة في 23 حالة (88.4%). أظهرت المزارع المصابة صورة من النشاط الخلوي المرضي النموذجي لفيروس الهربس البسيط - تكوين خلايا عملاقة متعددة النوى أو تراكم خلايا مستديرة ومتضخمة على شكل عناقيد. في 52.1% من الحالات، أمكن الكشف عن بؤر النشاط الخلوي المرضي للفيروس بالفعل بعد 16-24 ساعة من الإصابة. بعد 48-72 ساعة من حضانة المزارع المصابة، ارتفعت نسبة المواد التي تسبب تدميرًا نوعيًا للخلايا إلى 87%. وفي 13% فقط من الحالات، تم الكشف عن نتائج إيجابية بعد 96 ساعة أو أكثر من الإصابة أو أثناء المرور المتكرر.

طرق التشخيص المختبري لعدوى الهربس المعمم

الطرق الرئيسية التي تهدف إلى الكشف عن (عزل) فيروسات الهربس وجزيئاتها ومكوناتها	طرق مساعدة تهدف إلى الكشف عن الأجسام المضادة لفيروسات الهربس في السوائل البيولوجية، والكشف عن التحولات الأنزيمية في مصل الدم
عزل فيروسات الهربس من الخلايا الحساسة ومزارع الحيوانات المجهر الإلكتروني المباشر والمناعي المتغيرات المباشرة وغير المباشرة لطريقة المناعة البيروكسيديز المتغيرات المباشرة وغير المباشرة لطريقة الأجسام المضادة الفلورية متغيرات اختبار المناعة الإنزيمية في الطور الصلب متغيرات طريقة التهجين الجزيئي (DNA-DNA) تفاعل البوليميراز المتسلسل تفاعل تراص اللاتكس	اختبار التحييد اختبار تثبيت المتمم اختبار تراص اللاتكس النسخة غير المباشرة من طريقة الأجسام المضادة الفلورية النسخة غير المباشرة من طريقة المناعة البيروكسيديزية متغيرات اختبار المناعة الإنزيمية في الطور الصلب طريقة النقل المناعي طريقة تثبيت المتمم الشعاعي تحديد مستويات الألانين وأسبارتات أمينوترانسفيراز

تُستخدم الطرق المصلية لتشخيص داء كثرة الوحيدات المعدية (عدوى يسببها فيروس إبشتاين بار). تفاعل بول-بونيل مع خلايا الدم الحمراء للخيول، أو عيار تشخيصي 1:28 أو أعلى في اختبار مصل دم واحد، أو زيادة الأجسام المضادة أربعة أضعاف عند فحص المصل المزدوج. يُستخدم تفاعل هوف-باور مع معلق 4% من خلايا الدم الحمراء للخيول الفورمالينية. تُؤخذ النتيجة في الاعتبار بعد دقيقتين؛ ففي داء كثرة الوحيدات المعدية، يكون التفاعل عالي التحديد.

يجري حاليًا تطوير طريقة اختبار مناعي إنزيمي (EIA) لتشخيص داء كثرة الوحيدات المعدية. في هذه الحالة، تُحدَّد الأجسام المضادة IgG وIgM في مصل المريض عن طريق حضنه مع الخلايا الليمفاوية المصابة بفيروس إبشتاين بار، يليه العلاج بالأجسام المضادة الفلورية. في المرحلة الحادة من المرض، تُحدَّد الأجسام المضادة لمستضد القفيصة الفيروسية بنسبة 1:160 فأكثر.

عند استخدام عدد من أنظمة الاختبار التجارية المستوردة، يُمكن لاختبار ELISA الكشف عن: الأجسام المضادة لغلاف فيروس إبشتاين بار، والأجسام المضادة لمستضد فيروس إبشتاين بار المبكر، والأجسام المضادة الكلية لمستضد فيروس إبشتاين بار المبكر، والتي تُحدد في المرحلة الحادة من المرض في كلٍّ من النواة وسيتوبلازم الخلية، والأجسام المضادة المحدودة لمستضد فيروس إبشتاين بار المبكر، والتي تُحدد في المرحلة الحادة من المرض في كلٍّ من النواة وسيتوبلازم الخلية، والأجسام المضادة المحدودة لمستضد فيروس إبشتاين بار المبكر، والتي تُحدد في ذروة المرض فقط في سيتوبلازم الخلية، والأجسام المضادة لمستضد فيروس إبشتاين بار النووي. يتيح استخدام أنظمة الاختبار هذه التشخيص التفريقي لعدد من الأمراض المرتبطة بفيروس إبشتاين بار.

بعد اختبار ELISA الإيجابي الذي يكشف عن الأجسام المضادة لـ EBV، يتم إجراء تفاعل المناعة التأكيدي، والذي يحدد وجود الأجسام المضادة لبروتينات علامة EBV الفردية (بروتينات p): p23، p54، p72 (يشير وجود هذا البروتين إلى إمكانية تكاثر EBV)، p 138. كما تُستخدم طرق المختبر المذكورة أعلاه لمراقبة فعالية العلاج.

تتراوح حساسية الطرق الفيروسية بين 85% و100%، وخصوصيتها بين 100%، وتستغرق الدراسة من يومين إلى خمسة أيام. تُستخدم طريقة الفلورسنت المناعي المباشر (DIF) مع الأجسام المضادة متعددة النسائل أو أحادية النسيلة ضد فيروس الهربس البسيط من النوع الأول والثاني (HSV-1 وHSV-2) بكثرة في التطبيقات العملية. تتميز طريقة الفلورسنت المناعي المباشر بسهولة تكرار نتائجها في المختبرات السريرية التقليدية، وهي غير مكلفة، وتتجاوز حساسيتها 80%، وخصوصيتها بين 90% و95%. كشف الفحص المجهري المناعي عن وجود شوائب سيتوبلازمية، وسمات مورفولوجية، ونسبة الخلايا المصابة في مسحات - كشطات من مجرى البول، وقناة عنق الرحم، وعنق الرحم، والمستقيم.

تُعطي طريقة PIF فكرةً عن الخصائص المورفولوجية للخلايا والتغيرات في موضع مستضدات فيروس الهربس البسيط. بالإضافة إلى العلامات المباشرة لتلف الخلايا الناجم عن فيروسات الهربس (الكشف عن توهج محدد)، توجد علامات غير مباشرة للإصابة بالهربس وفقًا لبيانات PIF:

• تجمع المادة النووية، انفصال النواة النووية؛
• وجود ما يسمى بالنوى "الثقبية"، عندما يتبقى غلاف كروي واحد فقط من نواة الخلية؛
• وجود شوائب داخل النواة - أجسام كاودري.

عند إجراء اختبار PIF، يتلقى الطبيب تقييمًا نوعيًا وكميًا لحالة الخلايا المصابة، والذي استخدمناه لتقييم فعالية العلاج المضاد للفيروسات باستخدام الأسيكلوفير (AC). وهكذا، فُحص 80 مريضًا مصابًا بالهربس التناسلي البسيط (GH) باستخدام طريقة PIF في الديناميكيات. وتبين أنه إذا كانت نسبة الخلايا المصابة (50-75% فأكثر) في مسحات 88% من المرضى قبل العلاج بأسيكلوفير، فبعد دورة واحدة من الأسيكلوفير، تم اكتشاف خلايا سليمة في مسحات 44% من المرضى، وفي 31% من الحالات، لوحظت خلايا مصابة مفردة، وفي 25% من المرضى، وصلت نسبة الخلايا المصابة إلى 10%.

محتوى الخلايا المصابة في مسحات (تفاعل PIF) للمرضى المصابين بالهربس التناسلي المعالجين بالأسيكلوفير

فترات المرض	نسبة المحتوى في اللطاخات
	الخلايا المصابة					الخلايا الطبيعية
	أكثر من 75%	50-75%	40-50%	10%	خلايا مفردة في مجال الرؤية
الانتكاس (قبل العلاج)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
التحسن (بعد العلاج)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

باستخدام اختبار PIF وطريقة التهجين النقطي لسنوات عديدة، لوحظ تطابق نتائج الدراسة في ما يقرب من 100% من الحالات. تجدر الإشارة إلى أنه لزيادة موثوقية تشخيص الهربس، وخاصةً في حالات الهربس دون السريرية أو منخفضة الأعراض، يُنصح باستخدام طريقتين أو ثلاث طرق تشخيصية مختبرية في العمل، خاصةً عند فحص النساء الحوامل، والنساء ذوات التاريخ التوليدي غير المواتي، والأشخاص الذين يعانون من تشخيص أمراض نسائية غير محدد.

لذلك، في تشخيصات تفاعل البوليميراز المتسلسل للعدوى الفيروسية والبكتيرية في الجهاز البولي التناسلي، من الضروري تقييم النتائج الإيجابية المُحصّلة مع مراعاة التاريخ المرضي، ووجود (أو غياب) أعراض سريرية محددة للمرض. إذا كُشف عن الكلاميديا باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل، ففي هذه الحالة يكون هناك احتمال كبير للإصابة بالعدوى، ويمكن حل مشاكل العلاج بناءً على ذلك. في حالة الكشف عن الميكوبلازما (اليوريا)، وهي كائنات دقيقة انتهازية، يلزم إجراء دراسات زراعة إضافية لتأكيد التشخيص، أي زرع مادة من المريض في مزارع خلوية حساسة. فقط في حال الحصول على نتائج إيجابية في التحليل الزراعي، يمكن الحديث عن تأكيد مختبري لتشخيص داء الميكوبلازما. ستسمح الطريقة نفسها، عند الضرورة، بتحديد حساسية الميكوبلازما المعزولة لأشكال الجرعات المستخدمة بشكل متكرر (المضادات الحيوية، الفلوروكينولونات، إلخ).

من الممكن الإصابة المتزامنة بعدة فيروسات من عائلة فيروسات الهربس. غالبًا ما رصدنا إصابة مريض واحد بفيروسات HSV-1 وHSV-2 وCMV. كان المرضى الذين يعانون من أعراض سريرية ومخبرية لمتلازمة نقص المناعة المكتسبة الثانوية (المرضى المصابون بأورام الدم، والأورام، ومرضى فيروس نقص المناعة البشرية) أكثر عرضة للإصابة بعدة فيروسات هربس بشكل ملحوظ. وبالتالي، فقد ثبت أن الاضطرابات السريرية والمناعية التي تتطور في عدوى فيروس نقص المناعة البشرية مصحوبة بزيادة في عدد فيروسات الهربس التي تم اكتشافها بطريقة التهجين الجزيئي. في هذه الحالة، يمكن اعتبار الكشف المتزامن المعقد عن الحمض النووي لأنواع HSV-1 وCMV وHHV-6 هو الأكثر أهمية من الناحية التنبؤية.

[ 1 ]، [ 2 ]، [ 3 ]